省部重点实验室
第1楼2012/05/15
再说说为什么要正向使用,这个跟装柱的方向有关系,和上面说的一样,装柱的时候是按照与柱身箭头相反的方向装填的,在底部的填料会比较紧一些(由于高压下不锈钢管会发生细微的形变,管径增大,而装柱完成后不锈钢管恢复原状,柱内填料能支撑一定的压力,使这段压力无法排除会保留在色谱柱的底部,其结果是底部的填料会更紧密一些),如果把新柱子的入口端筛板打开您会发现填料会多出来约1mm左右,就是这个道理。既然我们知道打开后会凸出来1mm,那么就不难理解正向使用的必要性了,因为柱头上的填料有所损失能得到及时的补充(填料的损失通常是从柱头开始的,主要是针对样品中伤柱子的成份,而来自流动相造成的损伤往往是整体性的,因为进样量是很少的,流动相的用量却很大),不至于柱头塌陷,造成死体积。
还说一下反向冲洗的优势。两个理由,一是固体颗粒物质通常会累积在柱头上,正向冲洗是无法洗下来的,而反向冲洗则多多少少能冲下来一些,延缓了柱压升高的时间。二是强保留物质在柱头上的累积,正向冲洗需要冲洗整个柱床的距离,本身就是强保留的东西,要想把它冲下来得需要花多少时间?也许用纯甲醇或乙腈冲洗1个小时也冲洗不下来,反而造成了对柱床的二次污染;而反冲则只需要冲洗柱头上一点点的距离,也许1cm长度都不到,相比正向冲洗该要容易得多。
由上理由,孰优孰劣结论自然不难得出。