瓢虫
第1楼2006/04/26
荧光检测
荧光检测的主要缺点在于只有少数化合物产生荧光。大多数的分子不发荧光,但含有可衍生的官能团用于合成能发荧光的衍生物,例如,邻苯二甲醛是一种常用荧光基团用于柱后衍生氨基酸。虽然荧光检测很灵敏,但对于常见的样品分析来说不需要如此高的灵敏度。因为ELSD的响应不依赖于荧光基团,所以不需要衍生,因此大大降低了样品预处理和分析时间。
示差检测:
虽然示差检测在原理上是通用型检测器,但是它的灵敏度低,和梯度脱洗不相容,因此它对于HPLC来说不是理想的检测器。室温的变化会影响基线的稳定性,大的溶剂前沿峰可能会掩盖前期脱洗的色谱峰。因为ELSD在检测前将流动相蒸发,所以基线的噪声和漂移都很小,因此基线稳定和样品检测的灵敏度高。流动相的蒸发使得ELSD和梯度脱洗相容,因而可提高色谱分离的分辨率和缩短分离时间。另外ELSD比RI检测蔗糖灵敏度高和基线稳定。
应用实例:
近年来,脂类在生物学和经济领域中的重要性正在日益引起广泛的关注。脂类的分析方法对于许多研究工作,临床使用和质量控制方面都非常重要。大多数的脂类分子都缺乏适当的发色团,因此脂类除非通过衍生化,否则不能用紫外检测。一般但一样品种含有的各种脂类其极性差异很大,弱项要达到个作分的最佳分离和分辨率需要使用梯度脱洗,因而限制了示差检测器的使用。不同于UV和RI的局限性,ELSD是脂类检测的有用工具。
碳水化合物不带有发色团,因而不能用UV来检测。他们通常用氨基柱或者阳离子交换树脂分离。但是示差检测器不是很灵敏,而且需要控制温度来维持基线稳定,不能与梯度脱洗相容。ELSD灵敏度高,基线稳定,与梯度脱洗相容。
随着高聚物和表面活性剂在许多行业中的广泛应用,简单和可靠的分析方法的尤为重要,他们通常是不含有发色团的复合分子。此类化合物不带有适当的发色团和分离是需要采用梯度脱洗意味着不能采用示差和紫外检测器。ELSD检测高聚物和表面活性剂可以保持基线稳定。
在科研、临床和生产的工艺控制上,药物需要分析评估。目前,随着日益增长的加速药品开发的要求,药品工作者需要一种开速的鉴定方法来测定带物的代谢物、杂质、降解物和各种天然产物,许多不含有适当的发色团,限制了紫外检测器的使用。示差比紫外检测器的灵敏度要低,且不能与梯度脱洗相容,而复杂的药品分析常需要梯度脱洗。ELSD的通用检测能力和梯度相容性使得ELSD是药物分析的理想工具。因为ELSD的响应接近于代表产品的质量,所以即使在降解产物和杂质的性质不明确的情况下ELSD的使用为药物杂质分析提供最快速的方法。
结论: 蒸发光散射检测器正日益成为分析碳氢化合物、表面活性剂、聚合物、脂肪酸和氨基酸、油、和其他难检样品的强大工具,多用途的ELSD能检测任何挥发相低于流动相的样品,克服了常见于示差和紫外检测器的缺点。
紫外-可见光(UV-VIS)检测器
原理: 基于Lambert-Beer定律,即被测组分对紫外光或可见光具有吸收,且吸收强度与组分浓度成正比。
很多有机分子都具紫外或可见光吸收基团,有较强的紫外或可见光吸收能力,因此UV-VIS检测器既有较高的灵敏度,也有很广泛的应用范围。由于UV-VIS对环境温度、流速、流动相组成等的变化不是很敏感,所以还能用于梯度淋洗。一般的液相色谱仪都配置有UV-VIS检测器。
用UV-VIS检测时,为了得到高的灵敏度,常选择被测物质能产生最大吸收的波长作检测波长,但为了选择性或其它目的也可适当牺牲灵敏度而选择吸收稍弱的波长,另外,应尽可能选择在检测波长下没有背景吸收的流动相。
二极管阵列检测器(diode-array detector, DAD): 以光电二极管阵列(或CCD阵列,硅靶摄像管等)作为检测元件的UV-VIS检测器(图8-15)。它可构成多通道并行工作,同时检测由光栅分光,再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号,然后,对二极管阵列快速扫描采集数据,得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。与普通UV-VIS检测器不同的是,普通UV-VIS检测器是先用单色器分光,只让特定波长的光进入流动池。而二极管阵列UV-VIS检测器是先让所有波长的光都通过流动池,然后通过一系列分光技术,使所有波长的光在接受器上被检
直接紫外检测: 所使用的流动相为在检测波长下无紫外吸收的溶剂,检测器直接测定被测组分的紫外吸收强度。多数情况下采用直接紫外检测。
间接紫外检测: 使用具有紫外吸收的溶液作流动相,间接检测无紫外吸收的组分。在离子色谱中使用较多,如以具有紫外吸收的邻苯二甲酸氢钾溶液作阴离子分离的流动相,当无紫外吸收的无机阴离子被洗脱到流动相中时,会使流动相的紫外吸收减小。
柱后衍生化光度检测: 对于那些可以与显色剂反应生成有色配合物的组分(过渡金属离子、氨基酸等),可以在组分从色谱柱中洗脱出来之后与合适的显色剂反应,在可见光区检测生成的有色配合物。