【转】色谱柱中的流动相会排干吗？等相关问答

现在许多高效液相色谱仪都具备自保功能，当流动相吸干了，HPLC系统会自动停止工作，如HP1100。但是有些较老型号的HPLC仪并不具备这种功能，泵依然会不停运转，的确，泵不能输送空气，但是在运转的时候可以保持泵前后空气的连贯性，所以色谱柱中是否排干流动相取决于安装的位置，如果流动相瓶和泵都高于色谱柱，且柱后端低于柱前端，色谱柱中的流动相会非常缓慢的从柱中流失，至于是否能排干所有的流动相，要看这种情况保持的时间。
当柱的某一端发生干涸后，固然可以通过小新的办法弥补，但是终归会对色谱柱造成伤害，柱效会有所降低，所以尽量避免出现干涸的情况。

高效液相色谱柱是比较娇贵的东西,尽管将流动相排干可以补救,但最好不要那样做,有一次不小心流动相用光了,结果柱压急剧下降,基线波动很大,害我脱了好长时间气才搞定.所以当柱压或基线有问题是有可能是有气泡或流动相不足.

建议将问题改成这样提法：
1、对泵有没有损害？
2、损害的部位是哪里？
3、如果损害后，怎么处理？
4、怎样避免这种情况发生？

１　 如果不是缓冲盐作流动相，对泵没什么损害．
２　如果时间不是很长，对柱子的损害也很微小，
　　我们实验室出现过几次类似的情况（＞半小时），柱子没什么问题
　（当然，发现后要用脱气良好的甲醇或乙腈除去柱中的空气）．
３　如果时间过长（具体多长还没试过），最坏的结果就是柱头干裂，处理的方法：或是把柱头重新添一下（一定要找很专业的人士修补！），或是牺牲柱效将就着用，或是花钱换柱子．
４　避免此种情况不同的实验室采取的方法也不同，主要是责任心和实验管理的问题．刚买来的仪器都是宝贝，恨不得吃睡都在一起，发生此种情况的几率几乎为０．　时间长了，就不好说了，要是实验室管理不善或实验者责任心不强，那就要靠运气了．　

色谱柱的正确使用和维护是十分重要的，稍有不慎就会柱效降低，缩短寿命甚至损坏。在色谱操作过程中，需要注意下列问题，以维护色谱柱。
（1）避免压力和温度的急剧变化以及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处突然掉下来都会影响柱内的填充状况；柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料，因此在调节流速时应缓慢进行，在阀进样时阀的转动不能过缓。
（2）一般来说色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲去除柱头的杂质。否则反冲的话，会迅速降低柱效。
（3）选择使用适宜的流动相，以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前连接一预柱，分析是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱前被硅胶饱和，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。
（4）避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱，也有浸透限制固定相短柱。保护柱可以而且应该经常更换。
（5） 经常用强溶剂冲洗色谱柱，清除保留在柱内的杂质。在进行清洗时，对流路系统中流动相的置换应以相混容的溶剂逐渐过渡，每妙种流动相的清洗溶剂及顺序，作为参考：硅胶柱以正己烷，二氯甲烷和甲醇依次冲洗，己烷使硅胶表面重新活化。如果下一步分析程序的流动相不含缓冲液，那么可以省略最后用水冲洗这一步。一氯甲烷能洗取残留的非极性杂质，在甲醇冲洗时重复注射100－200μl 四氢呋喃数次有助于除去疏水性杂质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液能除去类脂。有时也注射二甲亚砜数次。此外，乙腈，丙酮和三氟醋酸（0.1％）梯度洗脱能除去蛋白质污染。
（6）保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或者甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发干燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜