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不完全去藕的技术请教: HSQC-TOCSY

核磁共振技术(NMR)

  • 在我们的实验中,由于各种J耦合的存在,使得谱峰很复杂,但是又需要单键的CH间的J耦合的存在。因此想对脂肪族C范围内的(谱宽大概30-40个ppm)峰进行不完全去藕,也就是想将该范围内的表观J耦合值降低(一般降到原来的30%-60%即可,降低的倍数没有要求,而且不同的地方,降低倍数可以不同)。
    由于是核磁新手,向大家请教一下,使用那些脉冲技术能有有这样的效果及其参数。
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  • sslin

    第1楼2006/05/03

    是想做耦合的碳谱吗? 目的是什么?
    由题意应该是想做 off resonance decoupled 13C NMR
    和平常的耦合碳谱不同的地方在于: 氢对碳的去耦功率 (dpwr) 调小些; 氢的去耦位置也由原来在氢谱中间改成在 TMS 的右边几个 ppm 的位置.
    如此设置可以得到裂峰较窄的碳谱.

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  • ironegg

    第2楼2006/05/04

    终于有人回了。
    我可能没有讲清楚,我是作的一个H谱,HSQC-TOCSY,采样时(H采样)由于远程的耦合包括二键,三键的CH耦合和HH耦合使得谱的烈分相对复杂,而且有重叠,不能分辨。
    而我们同时需要单键的CH烈分产生的锋出现。因次想把CH耦合的表观值缩小,使得使得小的耦合消失,大的耦合(单键)缩小一点,但是对单键耦合值是多少到不关心,允许不同的J值,缩小不同的倍数。不知道采用什么序列可以。

    另外不知道能不能在采样时,使得HH的同核耦合也缩小阿。

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  • celan

    第3楼2006/05/06

    我同意sslin老师对你的问题的提问.
    你的目的之一应该是测定偏共振谱,也就是压缩C-H偶合常数.
    HSQC-TOCSY谱提供的信息丰富,但解析起来要非常细心才好.
    请谈谈为什么"同时需要单键的CH裂分产生的锋出现"?

    ironegg 发表:终于有人回了。
    我可能没有讲清楚,我是作的一个H谱,HSQC-TOCSY,采样时(H采样)由于远程的耦合包括二键,三键的CH耦合和HH耦合使得谱的烈分相对复杂,而且有重叠,不能分辨。
    而我们同时需要单键的CH烈分产生的锋出现。因次想把CH耦合的表观值缩小,使得使得小的耦合消失,大的耦合(单键)缩小一点,但是对单键耦合值是多少到不关心,允许不同的J值,缩小不同的倍数。不知道采用什么序列可以。

    另外不知道能不能在采样时,使得HH的同核耦合也缩小阿。

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  • celan

    第4楼2006/05/06

    楼主的题目是:
    <不完全去藕的技术请教: HSQC-TOCSY>
    HSQC-TOCSY是全相关谱和检出H的异核单量子相干谱的组合脉冲实验,和不完全去藕的技术不是一回事.
    请问楼主测定的是哪类化合物?

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  • ironegg

    第5楼2006/05/06

    我测定的物质很简单,是20种氨基酸的混合物,在ph值为1-2的重水中。
    在35ppm到55ppm处由于峰的耦合烈分使得许多峰重叠在一起。但是我要计算由于C-H单键耦合所产生的三个峰的面积比,这样可以知道同位素标记的比例。想除掉其他的C-H耦合。
    不知道,单单用C的硬脉冲可不可以?或者还有其他更好的方法吗?

    celan 发表:楼主的题目是:
    <不完全去藕的技术请教: HSQC-TOCSY>
    HSQC-TOCSY是全相关谱和检出H的异核单量子相干谱的组合脉冲实验,和不完全去藕的技术不是一回事.
    请问楼主测定的是哪类化合物?

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  • celan

    第6楼2006/05/06

    [quote]原文由 ironegg 发表:我测定的物质很简单,是20种氨基酸的混合物,在ph值为1-2的重水中。
    在35ppm到55ppm处由于峰的耦合烈分使得许多峰重叠在一起。但是我要计算由于C-H单键耦合所产生的三个峰的面积比,这样可以知道同位素标记的比例。想除掉其他的C-H耦合。
    不知道,单单用C的硬脉冲可不可以?或者还有其他更好的方法吗?
    [quote]

    氨基酸的混合物,55ppm左右基本上是连NH4(PH1-2)的C信号.
    你"要计算由于C-H单键耦合所产生的三个峰的面积比',看来你测定的是偶合13C谱了?问题是你赶兴趣的是哪几个氨基酸?你要同位素标记哪个碳?
    你不是测定过TOCSY吗?混合物的TOCSY当然很复杂,可以使用selective TOCSY,图谱就很清楚了.
    你"要计算由于C-H单键耦合所产生的三个峰的面积比"?我认为你的实验设计思路值得考虑.请原谅.

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  • ironegg

    第7楼2006/05/06

    sorry,我的表达一团遭。
    我的HSQC-TOCSY是2D的先是从Hi-到Ci,然后再Ci上标记,再传回给Hi,然后Hi的极化TOCSY传递到其余的Hj,在Hj上进行采样。这样得到一个2D的谱。F1是C,F2是H,现在35-55ppm范围的C(F1)所对应的F2维出现了由于耦合存在的弥散的峰,有CH耦合产生的,也有HH耦合产生的。想把这些耦合除掉,在F2维只有CH单键耦合裂分产生的峰和未裂分的峰。

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  • celan

    第8楼2006/05/06

    我感觉你是把问题描述的比较乱.
    关键是要把研究的目的讲清楚,有了目的,才好设计方法.

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  • ironegg

    第9楼2006/05/06

    所有的峰都需要。多多益善。

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  • ironegg

    第10楼2006/05/06

    我们用13C标记的葡萄糖培养大肠杆菌。这样,大肠杆菌产生的氨基酸也会标记得有13C。我们就像知道,比如当氨基酸的第2个C是13C时,第4个C的位置上面,12C与13C的丰度的比例。
    因此首先利用HSQC,F1维标记这样保证最前面的是13C,而F2
    采样时峰的面积比就表征了12C与13C的丰度比。

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