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高效液相色谱法

  • jiliangceshi
    2012/07/09
  • 私聊

食品毒素/微生物检测

  • 1.原理
    样品经有机溶剂提取、净化和衍生化反应后,浓缩液注人HPI。C仪,经色谱柱分离,分离出的组分依次进人荧光检测器(发射波长360 nm‘,激发波长245 nm),产生相应的电信号,由记录仪记录响应信号,经微处理机自动计算及打印出样品中AFT含量(ng)。
    2.仪器
    HPI.C仪(具荧光检测器)。
    3。试剂
    ①硅镁型吸附剂:100~200目,350℃烘2 h,冷后装入密闭容器中,用前加水15%减活,平衡48h。可谇续傅用7天
    ②流动相:甲醇+O.01mol•I『’KH2P04(1+1)溶液配制后,经0.45 tan滤膜抽滤并脱气。
    ③层析柱,底层和上层为2.cIn厚的无水Na2S04,中层为0.4 g硅镁吸附剂,均以氯仿湿润。
    ④其他试剂参照薄层层析法。
    4.仪器工作条件
    ①具荧光检测器(激发波长245 nm、发射波长360 nm)。
    ②GAIN置16,Span置Max~
    ③柱:C18 10um(Radial pak cartridges)。
    ④流动相:甲醇+0.01tool/L KH2P04(1+1)。
    ⑤流速:1.3 mL/min。
    ⑥进样量:10“L。
    5.检测步骤
    ①样品提取与净化:准确称取样品10 g于具塞锥形瓶中,加50 mI。氯仿,振荡30 min,经过滤于层析柱中,用氯仿+正己烷(1+1)8 mI,,氯仿+甲醇(9+1)10 mL,淋洗除杂质,最后用20 mL丙酮+水(99+1)洗脱黄曲霉毒素,收集于烧杯中,在50℃水浴中挥干溶剂,再用氯仿
    分次将残渣洗人2 mL具塞试管中,并于50℃水浴中通Nz吹干。
    ②衍生化反应:向具塞试管中加200弘I。正己烷,50uL三氟乙酸,将盖盖紧,充分混匀1 min,静置30 rain后用Nz吹干。加100uL流动相,充分混匀,待检。
    ③标准液的处理:取适量标准应用液,按样品处理方法萃取、净化和衍生化反应,定容,使AFTBl、AFTMl最后浓度均为O.1 ng•uL_。。
    AFT保留时间及标准色谱图:保留时间(rain):AFTM,3.36,AFrG,4.72,A丌B16.00,FT G。1 n 1≯.AFTR 1 4 4n AFT标准任谱图田园夕n一1

    6.说明
    ①本法应在1天内完成检测,否则结果偏低。
    ②层析柱中硅镁吸附剂应先用氯仿调为糊状加入。
    本文参考了国家标准物质网资料中心的相关资料
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  • 去年冬天

    第1楼2012/07/19

    AFT标准任谱图田园夕n一1

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