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液相色谱(LC)

  • 我在做色素的测定,但是进样以后好像没有进到色谱柱,在清洗手动进样器的时候有色素洗出。是什么问题啊?是进样器的问题还是色谱柱的问题
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  • zhuwenjie

    第1楼2006/05/09

    是不是进样阀的位置弄错了。

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  • ahhfgxh

    第2楼2006/05/09

    你很可能是进样时的进样阀的位置搞错了,从新调整一下试试

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  • cannywh

    第3楼2006/05/09

    如果以前没有这样的问题,那我认为不是管路的问题,样品是溶在流动相里的吗?洗进样器的时候是水洗的看见色素的还是有机相洗看见的,是不是溶解度的原因。

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  • ahhfgxh

    第4楼2006/05/09

    你可以看一下仪器使用说明书。

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  • qiaoshi1981

    第6楼2006/05/09

    什么叫好象呀,如果没出峰就是没进去样.你的压力正常吗,是不是进样阀堵了.你的进样量是不是很大呀,样品是标准品吗,近样前用滤膜滤了吗.不好意思问题提的有点多

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  • ahhfgxh

    第7楼2006/05/09

    如有不明白的还可以交流啊

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  • ahhfgxh

    第8楼2006/05/09

    六通阀进样器

    六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器,它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用,各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。
    工作原理:
    1、手柄位进样(Load)位置时,样品经微量进样针从进样孔注射进定量环,定量环充满后,多余样品从放空孔排出;
    2、将手柄转动至进样(Inject)位置时,阀与液相流路接通,由泵输送的流动相冲洗定量环,推动样品进入液相分析柱进行分析。
    虽然六通阀进样器具有结构简单、使用方便、寿命长、日常无需维修等特点,但正确的使用和维护将能增加使用寿命,保护周边设备,同时增加分析准确度。如使用得当的话,六通阀进样器一般可连续进样3万次而无需维修。
    以下浅谈有关六通阀进样器的使用及保养事宜(仅供参考):
    1、手柄处于Load和Inject之间时,由于暂时堵住了流路,流路中压力骤增,再转到进样位,过高的压力在柱头上引起损坏,所以应尽快转动阀,不能停留在中途。在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱,是平头注射器。一方面,针头外侧紧贴进样器密封管内侧,密封性能好,不漏液,不引入空气;另一方面,也防止了针头刺坏密封组件及定子。
    2、六通阀进样器的进样方式有部分装液法和完全装液法两种。使用部分装液法进样时,进样量最多为定量环体积的75%,如20gL的定量环最多进样15p,L的样品,并且要求每次进样体积准确、相同;使用完全装液法进样时,进样量最少为定量环体积的3至5倍,即20gL的定量环最少进样60至1001aL的样品,这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液,达到所要求的精密度及重现性。推荐采用100ul的平头进样针配合20ul满环进样。
    3、可根据进样体积的需要自已制作定量环,一般不要求精确计算定量环的体积,譬如,一根名义上10gL的定量环,实际是9gL还是1lgL并不重要,因为被测样品和校正样品的进样体积保持一致,在计算结果时误差都被抵消了。
    4、进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质,样品溶液均要用0.45~tm的滤膜过滤。防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中,每次结束后应冲洗进样器,通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗,在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗,再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。


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  • ahhfgxh

    第9楼2006/05/09

    高效液相的保养
    1、保持贮液瓶清洁,对专用贮液瓶应定期清洗;用试剂瓶作贮液瓶时,要经常更换。
    2、定期(如半个月)在稀硝酸溶液中超声、清洗过滤器,保持过滤器畅通无阻。
    3、使用HPLC试剂和新蒸二次蒸馏水作流动相,所使用的溶剂其截止波长一定要低于检测波长,对不是HPLC级的试剂要进行过滤(HPLC试剂出厂前已用0.02μm滤膜过滤)。对流动相一定要脱气。
    4、每天开始使用仪器,注意放空排气,确保泵头、流动池以及其它流路系统中无气泡存在。
    5、珍惜保护色谱柱,避免柱头突然产生大的波动,扰动损伤柱床。如避免泵启动过速、升压过快、样品阀搬动过慢所造成的柱压大的波动。
    6、采用保护(警戒)柱,延长柱寿命。如污染物堆积于保护柱柱头,造成柱压升高,柱效下降,峰形变差时,卸下用强溶剂反冲后再用或更换新保护柱。
    7、避免超负荷进样,对250×4.6mm的柱子,绝对进样量应不超过100μg。在灵敏度允许的前提下,应尽量将试样浓度降低,减少绝对进样量(进样体积可保持不变),这是保持HPLC柱性能持久良好的重要举措之一。
    8、经常用强溶剂冲洗柱子,将柱内强保留组分及时洗脱出。反相柱用异丙醇--二氯甲烷(1:1)冲洗,正相(硅胶柱)用纯甲醇或异丙醇冲洗,时间均不少于1h。
    9、做完试验,及时用适当溶剂冲洗柱子和进样阀,尤其是对过夜的柱子和进样阀,一定要用足量的水彻底洗净其中的盐类、缓冲液,再用甲醇或乙腈冲洗,并保存在乙腈中。正相柱保存在非极性有机溶剂(如己烷)中。
    10、以硅胶为基质的柱子,如C-18、C-8等,要控制好流动相的pH值,一般不要低于2.5,不高于7.0。
    11、尽量用流动相溶解样品,一是避免出现拖尾峰、怪峰,二是避免试样在系统中由于溶解度降低而析出。
    12、对于阻塞或受伤严重的柱子,必要时,可卸下不锈钢滤板,超声洗去滤板阻塞物,对塌陷污染的柱床进行清除、填充、修补工作,此举可使柱效恢复到一定程度(80%),有继续使用的价值。
    13、色谱仪检测器输出与积分仪(处理机)要匹配,要合理设置参数如斜率、半峰宽、阈值、AUFS值、衰减等。将适宜的进样量和合适的参数结合起来,使主峰峰高达到记录仪满量程的80%左右。
    14、用HPLC分析酸碱性物质,由于吸附作用(次级保留)使峰开拖尾。加入改良剂可以大大改善峰形,提高积分的准确度。一般规则是:(1)分析酸性物质,可加入1%有醋酸。(2)分析碱性物质,可加入10-20mmol/L三乙胺。(3)酸碱物质混为一体,可同时加入1%的醋酸和10-20mmol/L三乙胺



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  • ahhfgxh

    第10楼2006/05/09

    有什么好建议可以发给我哟?

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