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非正常色谱图集锦（附原因分析与解决）——持续更新中哦（更新到10月30日）

sally0326

2012/09/12
食品检测

私聊

液相色谱（LC）

哎呀，首先感叹下，每次接到客户电话吧，都特别无语，不是因为客户问题对与否，而是经常相同的问题回答了N遍不同的客户，可纠结了~~公司来新人也是，总问~~不过问题基本已从根本上解决了，所以还好~~

为了培训新人写的东东，觉得内容应该大家有可能也会遇到，所以给大家分享下，有写得不对的地方忘各位指正哦

下面奇怪的东东来了

**色谱峰分叉

这个是分析谱图了，下面看看制备谱图

这个就是制备谱图了，呵呵

同志们看到了没，特别的画圈的地方，感觉好多个峰哦，貌似没分开的样子~~~实际上啊，这个化合物分开了，还分的挺好的，大家对比上面的分析谱图就能看出来，看看下面这个峰的含量检测就知道了

看到了吧，挺纯的哦，上面这个可是中压制备做的呢~~

当时纠结了半天，这个东东咋回事啊，烦人~~~

后来换了个流通池，好了！！！

思来想去，总觉得没找到问题根本，所以就拆开流通池研究了半天，你们猜原因是啥？？

呵呵检测器流通池体积过大：因为是制备型的嘛，流通池的通量一般都比较大，但是光程一般都小；各家检测器不同，我用的这个检测器内的死体积较大，而且这个流路是下进上出的，当化合物浓度高（出峰）的时候，就会导致流通池内浓度波动，影响检测结果了~~~后来换的流通池体积小一些，就没有这个现象~~后来就把流通池死体积做了调整哦~~

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下一个来了，哈哈

峰出刺

总见论坛里面有人问关于基线上出刺的问题，不知道是不是像下面这种谱图呢？

大家看一下画圈的地方哦，还有旁边的，是不是觉得很奇怪呢，怎么这个峰像下雨似的？？
实际上是这样的，一般的出峰不会这样，特别是分析性的，因为分析性的有几个特点：

a）样品浓度低，达不到检测器极限；

b）流速小，混合流量低，放热少，产生的气泡也就少

上面这个问题产生的原因是：

用的流量过大，混合放热严重，产生了大量气泡，所以造成的；而仪器本身并没有做脱气功能。这种现象特别在出峰的时候明显，为什么呢？？因为出峰的时候样品浓度很大，气泡瞬间通过检测池，造成浓度对比太大，透光率一下子上升，找出色谱峰出现倒刺

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**波浪峰

下一个又来了，嘿嘿~~最近家里装修房子，加上网络不好，所以更新得慢了点

同志们有遇到奇怪峰的也来跟帖哦

先说下，这个波浪峰出现的时候吧，本人也非常纠结，这是啥玩意啊？？基线好好的，怎么出峰就这鬼样呢？愁人

后来又狠命冲了冲系统，可还是一出峰就这样，抑郁死了~~~我的个娘也

NND，受不了了，不行咱拆吧，要不能咋的？而且奇怪的是走正相时候没事，走反相才有问题的呢，怪哉~~

拆了流通池看了半天也没看出个啥，反正就是把光路液路好好超声洗了下，在里面发现一个小颗粒，不知道是嘛东东，再装上去就没事了

估计原因：
1、流通池里面有析出的物质，不溶于流动相，且吸收波长为低紫外，所以走正相的254nm没有什么问题，走反相的就出事；而且这个东东不太大，出峰的时候由于流动相的原因，会在里面来回动，所以才会导致波浪峰的。

不知道大家拆过制备色谱的流通池没有？制备色谱的流通池一般面积都很大的（光路），实际上测量的就很少一个部分，其他部分就是没测到的。举个简单例子，此前拆了岛津的制备流通池，他们家的流通池光路部分是一个挺大的圆，在上面加固螺丝等固定，最后检测的光路就只有圆中心的一个点~~呵呵，回头我把拆的结构图发给大家研究下哦~~

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基线上移

其实这个问题的解释就更加简单了，不过解决的时候吧，着实让我郁闷了一大把

事情是这样的，某一客户打电话过来投诉，说仪器出峰后就一直平头不下来，我一听吧，第一反应是觉得客户可能样品饱和，再加上拖尾，所以出来的慢一些，解释完毕，总觉得有点不妥，让客户发色谱图吧，死活不愿意，算了，就先这么解释，让他等等，再不下来的话给我电话

果不其然，过了没多久又来电话了，说就是下不来，让他发图片，告诉色谱条件和做的东西是什么吧，墨迹半天，说是涉及公司机密，不能说~~~~晕倒~~~是在受不了，好说歹说问到色谱条件，了解完色谱条件后，肺都气炸了~~呜呜

那兄弟用的流动相是石油醚-乙酸乙酯（加10%丙酮），呜呜，疯掉了，告诉用户说是丙酮有紫外吸收，还非得不信，后来给查了吸光系数，又让他对着液相进了一针丙酮才行，倒~~

总结下出现的原因吧：
其实非常非常之简单，因为流动相里面有丙酮，丙酮在紫外下有吸收，貌似记得他的截止吸收波长是330nm，因此在通常254nm下其吸收非常强的。上图在出峰的时候，也刚好含丙酮一相用量比例提高，所以丙酮对紫外吸收，吸光度就一直处于饱和状态不下降。

所以兄弟们，其实做分离、分析，都应该对所有溶剂比较清楚，要不容易犯错哦~~

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**色谱峰颠倒

家里最近搬家，所以一直没有时间来更新呢，呵呵~~

这个是分析的色谱图哦，大家注意看我画圈的部分，是三个峰，注意大小，再看看下面的制备图

对比上面的分析图，有没有发现原来前面的小峰跑到最后面去了呢

实际上峰颠倒的现象我们经常见到的，分析中常常遇到。不过很多单位做分析，色谱柱就那么几根，选择性也差不多，所以一般不容易发现峰颠倒。

在制备中，特别要注意选择性，色谱柱的选择性很重要，要不峰丢失了就不好了，毕竟制备的目的是拿到目标物嘛。

所以了，一般做制备的，我的建议是分析柱和制备柱用同一厂家的，最好同一款柱子，就是填料孔径粒径有区别而已的那种，这样不用担心峰颠倒，而且能保证保留性质一样，选择性一样。

一般购买色谱柱的时候只有厂家的型号，没有具体的参数；建议各位在购买的时候，问下厂家这个色谱柱的选择性和适用性，还有就是含碳量等等，以保证能适合你的用途；特别是C18，一般分为亲水的、极性封尾、单封尾、双封尾、含碳量、金属含量、孔径、粒径、还有键合相等等，还有硅球结构什么的

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呵呵，之前出差给客户做仪器安装、培训去了，好久才回来，所以一直没更新呢

**直角峰

大家看下下面的这个图，可能好多人没注意，就是觉得有点奇怪而已了

无意中有一次做仪器测试的时候，发现这个图有点怪怪的，但是说不上来哪儿怪；大家仔细看下我画圈的地方，是不是感觉起峰的时候很怪的，一点渐变都没有，突然的就上去了，直角的哦！！！！

后来我上样量小了之后发现怎么没出峰呢？？？（这个样品之前做过，有出峰的，浓度什么的也没变）

再后来仔细研究了下基线后发现，基线无论怎么放大，居然都没有任何波动！！！抑郁！！！

到后来啊，总算明白了，是因为仪器的氘灯能量太高，都超出接受信号范围了，所以才这样的哦~~~~

简单来说吧，就和家用电灯一样的，灯泡瓦数太大的话，会比较刺眼，这样的话比如墙上有个小苍蝇，估计你都看不见的了，哈哈~~~

分
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