高效液相色谱法检测食品中四种尼泊金酯类防腐剂
摘要建立了一种用高效液相色谱法快速检测食品中四种尼泊金酯类防腐剂的分析方法。提取液经Agilent Eclipse XDB-C18液相色谱柱（250x 4.6mm，5 um）分离，流动相为甲醇-0.02mol/L乙酸铵（45：55）进行梯度洗脱，柱温箱温度为30℃，采用可变波长紫外检测器检测，检测波长254nm。四种尼泊金酯类防腐剂在（0.5～200）ug/mL范围内线性关系良好，相关系数均大于0.995，检出限为（0.032～0.046） mg/L（S/N=3），加标回收率为（99.8～105.2）% ，RSD小于5%。该方法操作简便、快捷、灵敏、准确，适合食品中尼泊金酯类防腐剂的定量测定。
关键词高效液相色谱法；食品；尼泊金酯类；防腐剂
High Performance Liquid Chromatography Detection of Four Kinds of Food Parabens Preservatives
Abstract: Food for the rapid detection of a high-performance liquid chromatography analysis of the four kinds of parabens preservatives. Extract Agilent Eclipse XDB-C18 HPLC Columns (250x 4.6mm, 5 um) column, the mobile phase gradient elution of methanol-0.02mol / L ammonium acetate (45:55), a variable wavelength UV detector detected, the detection wavelength of 254nm. Four kinds of parabens preservatives (0.5 to 200) ug / mL linearity in the range of a good relationship, the correlation coefficient greater than 0.995, the detection limit (0.032 to 0.046) mg / L (S / N = 3) recoveries (99.8 ~ 105.2)%, RSD less than 5%. The method is simple, fast, sensitive, accurate and suitable for leather products, parabens preservatives quantitative determination.
Key words:high performance liquid chromatography；food； Parabens; preservatives
1 前言
尼泊金酯也称对羟基苯甲酸酯，是国际上公认的广谱、高效、低毒类防腐剂。在食品、化妆品、纺织品与皮革和医药等领域中广泛使用[1-3]。尼泊金酯具有酚羟基结构，抗细菌性能比苯甲酸、山梨酸都强，其抑菌活性主要是由分子态起作用，且其分子内的羟基已被酯化，不再电离，所以它在pH3～8范围内均有很好的抑菌效果[4]。目前，国际上已经商品化的尼泊金酯类防腐剂主要有甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等。其中尼泊金乙酯和丁酯复配成的抗菌剂对食品中的各种致病菌均有效，其应用前景日益广阔[5]。尼泊金酯类防腐剂尽管低毒，但是使用量过大会危及人体健康，引起皮肤炎症等。因此开展食品中尼泊金酯类防腐剂检测方法研究有着重要的前瞻性和现实意义。
2 实验部分
2.1 主要仪器与试剂
岛津LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津仪器有限公司产），配有二元泵、真空在线脱气机、柱温箱和可变波长扫描紫外检测器；色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18液相色谱柱（250x 4.6mm，5 um）；KQ-500超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Al204电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；尼泊金甲酯（MP）、尼泊金乙酯（EP）、尼泊金丙酯（PP）、尼泊金丁酯（BP）均购于天津天泰精细化学品有限公司，色谱纯，纯度均≥99.0%。甲醇（色谱纯）、无水乙醇（色谱纯）、乙酸铵均购于上海国药集团有限公司，均为分析纯；超纯水（由南京普宁纯水机制得）。
2.2 溶液配制
标准储备液：分别称取尼泊金甲酯（MP）、尼泊金乙酯（EP）、尼泊金丙酯（PP）、尼泊金丁酯（BP）各0.100克，用无水乙醇溶解定容至100mL，此溶液浓度为1mg/mL。
2.3色谱分析条件
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18液相色谱柱（250x 4.6mm，5 um），流动相为甲醇－0.02mol/L乙酸铵（45：55）进行梯度洗脱，梯度洗脱程序见表1。采用可变波长紫外检测器检测，检测波长254nm，柱温箱温度为30℃，进样量10μL。
2.4样品处理
称取粉碎试样1.00克，置于50mL取四氟乙烯具塞离心管中，加入20mL甲醇，置于70℃超声波浴中萃取30min，冷却至室温，将萃取液转入平底烧瓶中。再加入20mL甲醇到样品中，重复以上操作一次。合并两次提取液，于40℃以下减压浓缩至5mL，过0.45um滤膜，上机待测。
3 结果与讨论
3.1样品提取溶剂的选择
尼泊金酯类微溶于水，易溶于醇、乙醚、丙酮等有机溶剂[1-3]。比较了甲醇、乙醚和丙酮的提取效率，发现丙醇与甲醇的提取效率相差不大，但都比乙醚提取效果好。由于丙酮提取液的颜色最深，因此选择甲醇作为提取溶剂。
3.2超声萃取条件的选择
选取有代表性空白样品，添加尼泊金甲酯MP标准溶液，使其含量为60mg/kg。准确称取1g上述粉碎样品，精确至0.01g ，按2.4方法于25、40、50、60及70℃的超声萃取温度下进行超声提取30min，其结果见图1。可以看出，70℃时萃取效果最好。考虑到萃取效果的彻底性，采用超声重复萃取两次，每次30min。
3.3色谱条件的选择
采用甲醇－0.02mol/L乙酸铵（45：55）作为流动相，经表1的梯度洗脱方式，可使4种物质完全达到基线分离且峰形良好，出峰时间短，达到分析要求。检测波长通常选择在250～260nm之间，经过实验发现，当检测波长为254nm时，检测器信号响应值最高。
柱温选择：在25℃～40℃之间改变柱温，结果发现25℃时尼泊金丁酯出峰晚峰形较宽，而40℃时出峰太快，检测样品时杂质峰对被测物有干扰，所以选择适中的柱温30℃时出峰时间合适，并且分离较好。其四种尼泊金酯类的混合标准溶液分离谱图见图2。
3.4标准曲线、线性范围及检出限
将四种尼泊金酯类的混合标准储备液进行逐级稀释，用超纯水定容，配制成0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0ug/mL混合标准使用液，在选用的色谱条件下，以峰面积对其质量浓度绘制标准曲线，以3倍信噪比（S/N=3）计算方法的检测限。4种物质的线性方程、相关系数及检出限见表2。
3.5 方法回收率及精密度试验
采用在实际样品中加标按2.3及2.4所述的测量方式进行回收率试验及精密度试验，每个水平的样品平行测定3次，结果见表3。从表3可看出：该法的加标回收率为（99.8～105.2）% ，精密度RSD小于5%。
4结论
本文建立了一种用高效液相色谱法快速检测食品中四种尼泊金酯类防腐剂的分析方法。提取液经Agilent Eclipse XDB-C18液相色谱柱（250×4.6mm，5 um）分离，流动相为甲醇-0.02mol/L乙酸铵（45：55）进行梯度洗脱，柱温箱温度为30℃，采用可变波长紫外检测器检测，检测波长254nm。四种尼泊金酯类防腐剂在（0.5～200）ug/mL范围内线性关系良好，相关系数均大于0.995，检出限为（0.032～0.046） mg/L（S/N=3），加标回收率为（99.8～105.2）% ，RSD小于5%。该方法操作简便、快捷、灵敏、准确，适合食品中尼泊金酯类防腐剂的定量测定。
参考文献
[1]李永飞, 许敏燕, 沈良等. 关于尼泊金酯等防腐剂对3种细菌抑制作用的研究[J]. 中国酿造, 2003, 6： 18～20
[2]王军锋, 李子荣. 尼泊金甲酯化妆品防腐剂抑菌效果的研究[J]. 安徽科技学院学报, 2008, 22（4）： 21～24
[3] 陈国安, 杨凯, 彭昌亚等. 新型食品防腐剂－尼泊金酯[J]. 中国调味品， 2003，3：31～36
[4] 袁海涛, 芮汉明, 宁正祥. 尼泊金酯类帮富马酸酯类抑菌效果的研究[J]. 食品科技， 2001，5：43～44
[5] 宋国胜. 食品防腐剂的技术发展趋势[J]. 江苏调味副食品， 2001，1：7～9
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