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成功的RNA提取需要小心翼翼吗?
nkwinter
2012/12/13
食品检测
私聊
生命科学仪器综合讨论
提过
RNA
的童鞋们都知道
RNA
容易降解,在提取过程中有很多注意事项,大多数人在提取
RNA
的过程中也都是小心翼翼。我也曾讲过我同学和我师姐提取
RNA
的经历,但是,成功提取
RNA
真的需要那么小心翼翼吗?答案是否定的,我获得这个答案是因为在后来的实验中我遇到了一个提取
RNA
的达人。
我要提取的植物样品,多糖特别多,按照常规的
trizol
方法提取根本就提不出来任何的
RNA
,用普通的试剂盒也是不行,研磨完的样品离心都没法离下去,别说提到
RNA
了。那时候,试验又是不得不做的,一时愁的不行。后来有人给我介绍了一个提取
RNA
特别牛的人,我就去找他帮忙,当时是说做技术服务,一个样品要
500
块钱呢。贵是贵了点,抱着试试看的态度也就同意了。
他提取的时候,我去学习了一下,真的是受益匪浅。我是一个但凡有简便方法就决不用麻烦方法的人,自从跟他学习了之后,我提
RNA
开始变得豪爽起来,并且提取的成功率也相当高了。好了,具体的说说他是怎么提取
RNA
的吧!
首先,研磨用的研钵不用烧了消毒,理由是
RNA
非常容易降解,
RNA
不可能完整的存在在研钵里。加
trizol
时可以不用戴手套,也不用处理过的枪头,因为
trizol
本身就可以抑制
Rnase
的作用,不可能导致
RNA
降解。用酒精洗的时候也不用小心,因为酒精也可以抑制
Rnase
的作用,保护
RNA
不被降解。只有最后一步用
DEPC
水重悬
RNA
的时候才需要特别注意,因为只有这一步
RNA
没有了保护剂,需要用处理过的枪头和
EP
管。这样呢,
RNA
就可以很轻松的成功提取了。
最后一步就是检查一下提取的
RNA
的质量,那就是要电泳了。电泳还是需要非常注意的,因为电泳的过程中
RNA
是会降解的,如果不用
DEPC
处理的电泳液和凝胶,那也一定要换新的电泳液,并制备一块比较薄的胶,电泳的电压可不能过快,否则
RNA
也会降解的。我就曾经有过电泳电压过快也没有用处理的电泳液电泳,什么也跑不出来的经历,后来才发现原来是电压过高的缘故。
就写到这吧,一点点小经验,分享给大家一下。
分
该帖子已被
版主-zhang8826857
加5积分,加2经验;加分理由:大力鼓励原创
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私聊
zhw19811005
第1楼
2012/12/13
不错的经验分享
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