省部重点实验室
第1楼2013/11/26
三、DNA重组与分子克隆化
为获得所需的基因或特异序列,需从细胞中分离得到目的基因与载体DNA重组,并用适当方法在宿主细胞中表达,扩增得到大量相同的DNA片段,称为DNA克隆,亦称分子克隆。
基本原理与过程:
1. 分离纯化目的基因
2. 目的基因 vector =重组DNA分子
3. 重组DNA分子导入受体细胞,并在其内增殖。
4. 筛选含有重组DNA的细胞——细胞克隆(cell clone),将转化的细胞置于琼脂表面,以刺激细胞克隆生长,这些细胞是由单个细胞形成的遗传相同的细胞群体,故称细胞克隆。再将每个克隆移至液体培养基中进行扩增。
5. 分离重组DNA克隆:即收获扩增的培养细胞,并选择分离重组DNA。
分离纯化目的基因 目的基因 vector =重组DNA分子
省部重点实验室
第2楼2013/11/26
重组DNA 和分子克隆