仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯
立即体验
APP内打开
回版面
1
收藏
点赞
拍砖
举报
取消
发布
当前位置:
仪器社区
>
生命科学仪器
>
生命科学仪器综合讨论
>
帖子详情
从动物肝脏中提取DNA
省部重点实验室
2012/12/18
私聊
生命科学仪器综合讨论
一、原理
:
在浓氯化钠(1―2mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很大,核糖核蛋白的溶解度很小,在稀氯化钠(0.14 mol/L)溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度很小,核糖核蛋白的溶解度很大。因此,可利用不同浓度的氯化钠溶液,将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。
将抽提得的核蛋白用SDS(十二烷基硫酸钠)处理,DNA或(RNA)即与蛋白质分开,可用氯仿―异戊醇将蛋白质沉淀除去,而DNA则溶解于溶液中。向溶液中加入适量乙醇,DNA即析出。
为了防止DNA或(RNA)酶解,提取时加入EDTA(乙二胺四乙酸)
二、实验材料与仪器
:
1、小白鼠肝脏
2、匀浆器
3、离心机5000r/min
4、量筒50ml(×1),25 ml(×1),10 ml(×1)
5、 吸管5 ml(×2)
6、水浴锅
7、真空干燥器
三、试剂
:
1.5 mol/L NaCl 溶液:将292.3g NaCl 溶于水,稀释至1000ml。
2.0.14mol/L NaCl―0.15mol/L EDTA―Na 溶液: 溶8.18g NaCL 及37.2g EDTA―Na 于蒸馏水,稀释至1000ml。
3.25% SDS 溶液: 溶25g 十二烷基硫酸钠于100ml 45% 乙醇
4.0.015 mol/L NaCL―0.0015 mol/L 柠檬酸三钠溶液: 氯化钠 0.828 g及柠檬酸三钠0.341g 溶于蒸馏水,稀释至1000ml。
5.氯仿―异戊醇混合液:氯仿:异戊醇=24:1(V/V)。
6.1.5 mol/L NaCL―0.15 mol/L柠檬酸三钠溶液:氯化钠 82.8 g 及柠檬酸三钠34.1 g溶于蒸馏水,稀释至1000ml。
7.3 mol/L乙醇钠―0.001 mol/L EDTA―Na溶液: 称取乙酸钠 408 g,EDTA―Na 0.372g 溶于蒸馏水,稀释至1000ml。
8.70%乙醇,80%乙醇,95%乙醇,无水乙醇。
9.二苯胺试剂
10.1 mol/L过氯酸溶液:将10ml过氯酸(70%)用蒸馏水稀释至110ml。
四、操作
:
1. DNA的分离纯化:
(1)将10头小白鼠迅速杀死,取出肝脏,用0.14mol/LNaCl―0.15mol/l EDTA溶液洗去血浆,剪碎,加入50ml0.14mol/L NaCl―0.15mol/lEDTA溶液,置匀浆器中研磨,待磨成糊状后,将糊状物离心10分钟(4000r/min),弃去上清液,沉淀用0.14mol/LNaCl―0.15mol/L EDTA溶液洗二、三次,所得沉淀为脱氧核糖核蛋白粗制品。
(2)向上述沉淀物加入0.14mol/LNaCl―0.15mol/L EDTA溶液,使总体积为44ml,然后滴加25% SDS溶液 3ml,边加边搅拌,加毕,置60水浴保温10分钟(不停搅拌)溶液变的粘稠并略透明,取出冷至室温。此步操作是使核酸与蛋白质分离。
(3)加入5mol/LNaCL10ml,使NaCl 最终浓度达到1mol/L,搅拌10分钟,加入月约一倍体积的氯仿―异戊醇混合溶液,振摇20分钟,离心10分钟(4000r/min)。去掉沉淀,上层清液徐徐加入1.5―2倍95%乙醇,DNA沉淀即析出,用玻棒慢慢搅动,则DNA丝状物即缠在玻棒上。
(4)将DNA粗品置于27ml 0.015 mol/L NaCl ―0.0015 mol/L柠檬酸三钠溶液中,再加入3ml1.5 mol/L NaCl―0.15 mol/L柠檬酸三钠溶液,搅匀,加入一倍体积氯仿―异戊醇混合液,振摇十分钟,离心(4000r/min,10分钟),倾出上层液体(沉淀弃去),加入1.5倍体积95%乙醇,DNA即沉淀析出。离心,弃去上清液,沉淀(粗DNA)按本操作步骤重复处理一次。
(5)将上步所得沉淀于27ml 0.015 mol/L NaCl―0.0015 mol/L柠檬酸三钠溶液中,然后以线状徐徐加入2倍95%乙醇,边加边搅,取出丝状DNA,依次用70%,80%,95%以及无水乙醇各洗一次,真空干燥。
2. 鉴定: 用二苯胺法测定DNA。
编辑: hollyemp
分享到
分
该帖子已被
版主-zhang8826857
加3积分,加2经验;加分理由:鼓励发帖交流
相关话题
1
五颜六色的采血管
2
人用肝素化采血管的质量控制
3
生气与疝气有关吗
4
硅胶假体-乳房植入物的安全性
5
肺癌概述及早期诊断
+关注
私聊
zyl3367898
第1楼
2012/12/18
应助达人
最好有图。后面没有了。
0
发表回复
近期热榜
迎国庆送壕礼!十月发帖抢大疆云台
【官方邀请】高效液相色谱使用情况有奖调研
喜迎国庆!第十七届原创大赛超级原创日参赛奖励翻倍
丹纳赫四十周年寄语征集领大礼包
热门活动
【售后专场--招聘会】
第三届微课大赛投票进行中ing
猜你喜欢
最新推荐
热门推荐
更多推荐
【求助】如何延缓电解质分析仪电极老化?
2007/01/27
检定菌传代标准操作规程(SOP)
分享
2013/06/11
混合磷酸盐用来配制缓冲溶液的,大家知道多少钱吗?
2006/03/28
【号外】该培训课程量大物美不忽悠,两位专家共同为你解读 《纳米颗粒分离纯化与特征鉴定的贝克曼解决方案》
分享
2017/11/09
从技术角度来选择二氧化碳培养箱
转帖
2012/05/01
Nature: 2011年度最佳图片
分享
2012/01/12
有哪位仁兄在生物公程类公司工作?求助
2006/05/26
【求助】有人用BIOLOG的微生物检测仪么?
2008/04/24
医疗仪器的革新:守护生命的科技力量
分享
2024/09/19
仪器的魅力:科技探索与精准控制的基石
分享
2024/09/19
Tigergene动物实验用颅钻
原创
2024/09/16
全光谱流式细胞仪原理,可以帮忙解答一下吗
原创
2024/09/09
bd流式细胞仪多少钱一台,可以帮忙解答一下吗
原创
2024/09/09
生物技术领域外商投资放开-干细胞重大利好!
原创
2024/09/09
化学发光免疫分析原理,能不能展开详细说说
原创
2024/09/07
Excounter第三代全自动外泌体分析仪重磅上市(让外泌体检测从此简单)
原创
2024/09/07
实验室容量瓶、移液管等玻璃器皿检定
求助
2024/09/25
标准溶液该如何配置?
第十七届原创
2024/09/25
微量注射器用移液器检定规程出具证书,带CNAS logo,合理吗?
求助
2024/09/25
关于气相基线高一倍求助
求助
2024/09/24
浅谈培养基的技术性验收
第十七届原创
2024/09/25
如果计量器具较小,校准标签贴不开怎么办?
求助
2024/09/26
【求助】申请CNAS实验室认可,文审阶段老师提出我司的组织机构图中未体现有关部门对实验室的支撑关系。请问如何修改?
求助
2024/09/24
气象色谱仪显示ALS 故障代码 153是什么情况
求助
2024/09/27
还有什么食品塑化剂含量可能超标呢
讨论
2012/12/18
求英文文献
已应助
2012/12/18
冬虫夏草切莫入“囤”与“炒”怪圈
分享
2012/12/18
求助文献5篇
已应助
2012/12/18
贬值进行时
原创
2012/12/18
CNAS-CL01:2006 4.1.3
咨询
2012/12/18
红外高手们请进!
求助
2012/12/18
液质联用的内标物与同位素稀释法来检测
已应助
2012/12/18
品牌合作伙伴
丹纳赫苏州基地 打工人的梦想
岛津
日立科学仪器
珀金埃尔默仪器(上海)有限公司(PerkinElmer)
日本电子株式会社
丹纳赫
安捷伦
赛默飞世尔科技
普析通用
欧波同
天美
天瑞仪器
德国耶拿
海能技术
马尔文帕纳科
磐诺科技
上海仪电科仪
梅特勒托利多
聚光科技
莱伯泰科
盛瀚
多宁生物
丹东百特
科哲
卓立汉光
屹尧科技
华谱科仪
宝德仪器
优莱博
HORIBA
布鲁克核磁
举报帖子
执行举报
点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...