【极限体验】高效液相色谱法检测瘦肉精方案

高效液相色谱法检测瘦肉精方案

近年，国内又发生“瘦肉精”食物事件引人注目。据悉，瘦肉精是一类动物用药，有数种瘦肉精是一类动物用药，有数种药物被称为瘦肉精，例如莱克多巴胺（Ractopamine）及克伦特罗（Clenbuterol）等。将瘦肉精添加于饲料中，可以增加动物的瘦肉量、减少饲料使用、使肉品提早上市、降低成本。猪食用后可大量吸收并大量沉积于肝、肺、肾中却不会中毒，而且还促进猪的骨骼肌(瘦肉)蛋白质合成和减少脂肪沉积。但是人体摄入较多“瘦肉精”后，会出现头晕、恶心、手脚颤抖、心跳，甚至心脏骤停致昏迷死亡等严重后果。据相关专家介绍，目前，检测瘦肉精的方法主要有四种，即高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱一质谱法（GC－MS）、毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）。现在主要采取的检测方法是高效液相色谱法（HPLC），优点是检测精确度高，灵敏度高，假阳性率低。

下面就介绍下瘦肉精--盐酸克伦特检测

盐酸克伦特罗结构式：

瘦肉精猪肉

实验部分

1.试剂

①盐酸克伦特罗标准品

②乙醚；分析纯

③正己烷：分析纯

④甲醇：色谱纯

⑤lmol／L盐酸溶液

⑥0．05mol／L乙酸缓冲液

⑦0．3mol／L乙酸缓冲液

⑧lmol／LNaOH溶液

⑨纯净水

2.仪器及设备

①高效液相色谱仪（配紫外检测器）

②匀浆机

③旋转蒸发仪

④电子天平：0.1mg
⑤离心机（10000r／mln以上）

⑥固相萃取装置

⑦固相小柱

3.提取和净化

取组织样品10g，加入30ml lmol／L盐酸溶液匀浆，超声波振荡3h，5000r／mln的速度离心10min，—上清液用lmo]／LNaOH溶液滴至碱性，乙醚或正已烷抽三3次，抽提液在水浴锅上蒸发至5ml后上Silioa小柱，以除去大部分杂质，洗脱液上Alu—mina A小柱，将待测成分吸附在小柱上，用0．05mol几乙酸缓冲液(pH7．0)洗涤小柱3次，o．3mol／L乙酸缓冲液洗脱待测成分，冷冻干燥，用0．5ml甲醇液溶解后取20uL供高效液相色谱仪检测。

4.色谱条件

色谱柱：Xtimate C18柱，250mmX4.6mm
流动相：甲醇—水(75+25)
流速：1.0ml／min
检测波长：245nm
温度：室温

进样量：20uL

色谱图：

5.测定

①标准曲线的制定，配置不同浓度的5个标样，按上述仪器操作条件供高效液相色谱仪分析；

②样品测定，按上述测定步骤进行；

③空白试验，除不加试样外，按上述测定步骤进行；

④回收率实验，样品中加入一定量的标样，按上述测定步骤进行。

6.检测限、校正曲线系数和回收率

本方法在猪的肌肉和肝脏组织中的检测限为0．01mg/kg，校正曲线系数为0.9998，回收率范围为70％-110％。

据报道，市民在现实生活中可以通过以下方法辨别猪肉是否有“瘦肉精”嫌疑：
■对肉要“察其色，观其形”。“瘦肉精”肉，脂肪层薄，颜色特别鲜红，瘦肉纤维疏松，时有少量“汗水”渗出肉面；而正常猪肉，脂肪洁白，肉色较浅，外表微干，有弹性，不会有“出汗”现象；
■因为动物摄入的外来毒素、药物及其代谢产物，大多在肝脏富集解毒，建议不吃或少吃肝脏。