双氰胺LC-MS/MS方法建立

johne0212

2013/01/28

私聊

液质联用（LCMS）

1.首先声明此方法里面涉及的任何仪器和耗材都是推荐使用，并不代表必须使用此仪器和耗材。使用相同类型的仪器和耗材能得到相同的分析结果。

2.其次，由于双氰胺同位素内标会在二周后才能得到，所以推荐用两点或者三点标准加入法对阳性样品进行定量。

3.由于时间有限，此方法难免有不当之处，请大家根据自己实验室条件更新。

DCD Method Setup (Modified FDA Method)

Instrument Condition

Mobile Phase B

10 mM Ammonium Acetate (pH=4.0)

Mobile Phase A

Acetonitrile (LC-MS Grade)

Column

Waters Acquity HIILIC,2.1*100 mm, 1.7um

Column Temperature

Flow ratio

0.3 mL/min

Gradient

Time	B (%)
0.00	10
2.00	10
4.00	50
5.00	50
5.01	10
10.00	10

MS/MS Parameters (Agilent 6410B+1200 RRLC)

Transition	Fragmentor	CE	Dwell Time (ms)
85.0-68.0 (Quantitative)	50	20	400
85.0-43.0 (Qualitative)	50	10	400

ESI Ion Source Parameters

ESI Model	Positive
Gas Flow	13 mL/min
Pressure	50 Psi
Gas Temperature	350
Capillary Voltage	2000 V
Resolution	Unit (both)
EMV	200
Divert Valve	From 0.5 min to 3 min to MS

Sample Preparation

1. Weigh exactly 1.00±0.01 g sample into 50 mL centrifuge tube

2. Add 7.5 mL formic acid solution (2 %, v/v) to dissolve the sample by shaking 5 min, then ultrasonic 30 min, and make sure there is no lump produced during mixing.

3. Add 12.5 mL acetonitrile and shake under 500 rpm for 5 min.

4. Centrifuge at 8500 g for 10 min, and transfer the supernatant into sample vial for injection.

Chromatograms

1. 1 ppb DCD Standard

分
该帖子已被版主-nankingee加6积分，加2经验;加分理由:感谢分享

相关话题

+关注

私聊

yuduoling

第1楼2013/01/28

除沃特世的仪器之外，别的仪器也可以做的吧

+关注

私聊

yongbudaoweng

第2楼2013/01/28

感谢楼主分享

+关注

私聊

dark_wzy

第3楼2013/01/28

谢谢楼主分享。追问一句，楼主觉得这个方法开发的难点或者关键点在哪里？

+关注

私聊

nphfm2009

第4楼2013/01/29

应助达人

“谢谢楼主分享。追问一句，楼主觉得这个方法开发的难点或者关键点在哪里？ ”同样也很想知道

+关注

私聊

chy57589893

第5楼2013/01/29

及时雨呀，参考了。谢谢

+关注

私聊

sukiliang

第6楼2013/01/29

参考了，谢谢楼主的分享！

+关注

私聊

herebin

第7楼2013/01/29

有个问题：hilic柱子水相多出峰快，你0～2min有机相比例只有10％，这个时候出峰比较快的。这样话，你这样的条件，双氰胺在色谱柱中的保留是很弱的。

+关注

私聊

johne0212

第9楼2013/01/29

由于时间仓促，方法有两处编写错误，一个是像您说HILLIC柱子应该是有机相该为90%。另一个是MS一个Transition输入有误，定量离子应该是68。已经修改，谢谢提醒。
herebin(herebin) 发表:有个问题：hilic柱子水相多出峰快，你0～2min有机相比例只有10％，这个时候出峰比较快的。这样话，你这样的条件，双氰胺在色谱柱中的保留是很弱的。