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HPLC维护(安捷伦)

液相色谱(LC)

  • HPLC维护(安捷伦)



    一、如何处理 HPLC 中的盐带来的问题?

    很多问题是由于流动相含有盐成分造成的。建议在清洗时将水加热后再冲洗,这样既可以将盐溶解的更好,也可以溶解一些脂溶性物质,会减少很多问题的发生,包括管路堵塞,盐析出,基线噪音……

    二、安捷伦1100及1200液相泵的日常维护

    泵是液相色谱的核心,泵将流动相从溶剂瓶输送到液相流路系统中,并要在高压下保持流量和压力的稳定。泵的状态正常是液相色谱准确分析的基础,所以平日一定要重视对泵的维护。下面就安捷伦1100/1200液相色谱泵的日常维护进行简要的介绍。

    1.流动相的准备
    为了防止颗粒性物质对泵组件的磨损,流动相(特别是水相)应该新鲜配置并且过滤。上机前对流动相进行适当的超声脱气,以保证更好的在线脱气和在线混合的效果。

    2.比例阀溶剂通道的分配
    四元泵的比例阀有A、B、C、D四个通道,建议将盐溶液接在下面的通道(A或D),将有机溶剂接在上面的通道(B 或C)上,也就是有机通道最好在盐溶液通道的上面。且建议用水定期冲洗所有比例阀通道除去可能在阀口析出的盐结晶。

    3.过滤白头的维护
    过滤白头位于排气阀内,是一种聚四氟乙烯材质的微孔过滤芯,用于过滤流动相中的微粒,是经常需要维护的地方。当系统压力有异常增高时,首先需要检查过滤白头是否阻塞了。判断的方法是:打开排气阀,以纯水作流动相,将流速设为5mL/min,如果泵压超过10bar,则说明过滤白头需要更换了。对过滤白头的预防性维护通常可以是1~2个月更换1次,更换时同时检查一下过滤白头前面的密封金垫,如果发现变形,也应及时更换。 如果过滤白头更换过于频繁,则需要认真检查一下流动相的品质,确保流动相上机前过滤,确保使用了合适的过滤膜。如果流动相有长菌现象,除了配置新的溶剂,还应对相应的溶剂管线和脱气机通道进行彻底的清洗。

    4.柱塞杆与柱塞密封圈的维护
    柱塞密封圈套在柱塞杆上用于隔离泵与外界,工作时,它和柱塞杆进行频繁的往复摩擦,使用一段时间后,会有一定的磨损,因而密封圈需要定期更换以保证系统的密封性。更换活塞密封垫时检查活塞杆上是否有划痕。有划痕的活塞将导致轻度渗漏,并降低密封垫的使用寿命。应尽早更换有划痕的活塞。

    柱塞密封圈有反相和正相之分,反相密封圈为黑色,石墨Teflon材质;正相呈橘黄色,聚乙烯材质,更适用于正相溶剂。1100/1200标配的是反相密封圈,正相应用时,需要更换为正相密封圈。

    盐溶液对柱塞密封圈的寿命有着很大的影响,使用有盐溶液作为流动相的体系时,要注意盐溶液通道的清洗,千万不能让盐溶液在系统中过夜,常常一个晚上析出的盐粒就会造成系统堵塞,对泵产生较大的损害。为了延长密封圈和柱塞杆的寿命,在经常使用较高浓度的缓冲盐溶液的情况下,建议安装柱塞清洗附件。柱塞清洗的原理在于:柱塞泵在工作时,虽然有密封圈密封,但由于毛细作用,还是会有一些流动相渗入到密封圈与柱塞杆之间。如果流动相中有缓冲盐,当柱塞杆壁上的溶剂挥发掉后,极细小的盐粒留了下来。这样的盐粒就象砂纸一样磨损着柱塞杆和柱塞密封圈,会大大降低柱塞杆和密封圈的寿命。柱塞清洗附件是在柱塞杆的中间加入了一个可以有水流过的腔体,通过水不断的流动,就可以带走渗进来的盐溶液,防止了盐粒的析出,保护了柱塞杆和柱塞密封圈。通常我们往柱塞清洗的水里加入10%的异丙醇,可以减小水的张力,便于清洗液流动,并且抑制长菌。但有一点要注意的是,装有柱塞清洗附件的泵头,清洗液流量可以很小(如没分钟几滴),但一定不要让清洗通道里干涸,如果水流光了,应该尽快换上新的溶液。否则会减少柱塞杆和密封圈的寿命。

    5.主动阀的维护
    主动阀是流动相进入泵体的门户。如果我们发现流量为零,流量不稳,或泵压波动特别大,常常都是因为主动阀漏或是堵了。主动阀里面装有一个小的单向阀芯,我们将其取下,在异丙醇内超声清洗一下,一般能解决这样的问题。如果超声不能解决问题的话,可以更换该阀芯。对于经常使用缓冲盐体系的用户,手头常备一个这样的阀芯是非常有用的,往往可以及时解决问题,大大的降低停机带来的损失。

    6.出口阀的维护
    出口阀内部也有,如果有盐粒或其它杂质渗入其中,也会造成出口阀的堵或漏,常常表现为压力的异常波动。通常我们可以用异丙醇或60度左右的热水冲洗系统,如果无效,在异丙醇中超声清洗它常常会解决这样的问题。
     
    三、保留时间重现性不好,可能的原因有哪些?

    保留时间不重现还会影响到峰面积的重现性,导致实验无法进行。引起这种现象因素很多,建议检查以下几个方面:
    - 确认流动相是新鲜配置的,比例没有错误。
    - 确认色谱柱是好的。
    - 检查一下溶剂瓶里的溶剂过滤器没有长菌,没有被堵塞。
    - 如果使用梯度洗脱方法,请确认平衡时间足够长。
    - 仔细观察柱前压的变化,如果压力稳定,就可以判断泵的系统没有问题,请更换新的色谱柱试试。
    - 如果是压力不稳定,一定会影响保留时间。

    四、柱前压不稳定,压力上下波动的常见原因?
     

    引起这种故障最常见的原因是泵里有气泡,建议用以下的方法排除。
    - 如果系统没有配置脱气机(二元泵),溶剂一定要经常超声脱气。
    - 脱气机的效率不够,特别是用甲醇/水的系统最容易发生。可以将A,B通道串联;C,D通道串联用来延长脱气的时间,效果非常明显。

    主动阀阀芯污染。 可以将阀芯取下,用甲醇超声清洗。
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  • 三人行

    第1楼2013/04/06

    续上
    五、为什么排气阀里的过滤芯经常堵塞?

    如果是排气阀里的过滤芯堵塞引起的压力升高,请仔细检查一下换下来的过滤芯。正常情况下,一个过滤芯可以使用6个月左右,如果经常更换就有问题。

    - 如果过滤芯的颜色发黑,说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的,请确认流动相使用的缓冲盐的浓度是否太高了,是否使用了柱塞清洗装置。 缓冲液在泵头内部析出的盐的结晶会加速密封垫的磨损。
    - 如果过滤芯的颜色是乳白色的,非常干净。说明过滤芯很有可能是被流动相污染了。 请检查一下是否使用了过期的溶剂(水,有机溶剂),或质量不好的溶剂。请马上更换别的品牌的溶剂或使用纯净水(推荐:娃哈哈纯净水)。
    如果流动相经过了滤膜过滤,请确认是否使用了正确的,优质的滤膜。建议先不要使用滤膜过滤流动相,看看是否可以解决过滤芯堵塞的问题。
    - 如果存放缓冲液或水的溶剂瓶不经常清洗,该通路会生长藻类,藻类会污染整个流路系统和脱气机的腔体,藻类及其代谢产物也会堵塞过滤芯。如果发生了这种情况,建议用60度的热水清洗溶剂瓶,并用异丙醇清洗整个管路和脱气机。
    建议一定要用棕色瓶存放缓冲溶液,避光,并且定期清洗溶剂瓶。

    六、峰面积或峰高重现性不好,偏差大,可能的原因有哪些?
     

    如果HPLC系统配有自动进样器,这种情况主要是自动进样器的问题。

    - 首先确认柱前压是稳定的,保留时间的重现性好。
    - 将自动进样器的抽样速度降低到50ul/min以下 (默认值是200ul/min)。如果样品粘度较大,降低抽样速度可以极大地改善粘度较大的样品的进样精度。
    - 如果进样针或针座有轻微的堵塞,对进样精度的影响也非常大。
    - 如果是手动进样器,请确认一定要使用Agilent配的标准进样针,且进样器的废液出口要与进样口水平,避免虹吸的影响。如果是满Loop进样,建议注射5倍Loop的进样体积。

    七、自动进样器的针头或针座经常堵塞,如何处理?
     

    - 如果针头或针座经常堵塞,请检查使用的进样瓶隔垫。质量不好和已经破损的隔垫易产生很多碎屑。进样时,这些细小的碎屑很容易将针头,针座堵塞。使用Agilent的正规隔垫并且经常更换旧的隔垫就可以避免这类问题。
    - 如果样品是经过离心处理的,是用针头吸取上清液进样, 请将针头进样位置提高。
    - 如果针头或针座发生了堵塞,可以用以下简单的办法处理:通过Chemstation诊断界面的更换针头,针座的程序将其取下,反接到泵的出口,用反吹的办法将其疏通。 大部分是可以顺利解决的。

    八、紫外检测器(DAD,VWD)信号波动大,噪音大,光强度检测通不过,如何处理?
     

    引起这种问题的因素很多,要一步一步排除,直到找到问题真正原因。

    - 确定柱前压稳定;溶剂(高纯度的有机溶剂, 水)使用正确,流动相脱气良好;

    - 检查检测器的氘灯是否已经到了使用寿命,是否更换过新的氘灯。

    - 用异丙醇清洗整个系统,更换过滤芯,排除污染源。

    - 清洗流动池和有关的透镜(需要工程师去现场服务)

     
    九、HPLC出“鬼峰”,如何排除?

    HPLC出“鬼峰” 大部分发生在反相体系(甲醇, 乙腈, 水),是溶剂被污染造成的。还有一种原因是进样系统有残留。

    - 先运行一个空白梯度洗脱的方法,从100%水过渡到100%有机溶剂,如果“鬼峰”出现,可以判断是水被污染了(水中有藻类Algae的污染)。如果是使用纯水机制作的水,这种现象是最常见的。建议用户更换“娃哈哈” 纯净水。

    - 进样系统有残留很容易判断,建议加强或改善洗针程序,延长冲洗Loop的时间。

    十、如何查看灯的使用时间或用新灯后如何重置"0"?
     

    在 ChemStation 软件的“诊断”级别中,单击检测器图标。就会看到一个下拉菜单,选择<显示模块详细信息>,然后会看到一个记事簿和扳手图标。单击此图标会看到另一个下拉菜单。选择<维护记事簿项>,然后选择“维护消息”项,查看灯的实际累加使用时间。如要换灯,选灯已更换,ChemStation 软件会提示您重新设置计数器。

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  • cminzhen

    第2楼2013/04/06

    很不错,一般液相容易出现的问题,楼主都列举出来了

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  • 三人行

    第3楼2013/04/06

    能够准确判断故障原因也是很重要的。

    cminzhen(cminzhen) 发表:很不错,一般液相容易出现的问题,楼主都列举出来了

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  • 天天洗碗

    第10楼2013/04/07

    过滤芯可以使用6个月左右

    是不是时间太短了点,半年就要更换,这耗材成本会增加啊

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  • 三人行

    第11楼2013/04/07

    这只是最保守的说法,能用还是继续用吧。

    天天洗碗(binglang1985) 发表:过滤芯可以使用6个月左右

    是不是时间太短了点,半年就要更换,这耗材成本会增加啊

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  • pear1213

    第12楼2013/04/08

    安捷伦的1100和1260。
    梯度洗脱,短柱,测试一个样品大约6-8分钟。
    1260主要跟MS联用。
    基线,尤其214基线偏移严重。
    不知道到底是什么原因。一直在尝试改变流动相中甲酸的浓度,可是没有效果。

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  • 三人行

    第13楼2013/04/08

    甲酸有末端吸收,是否可以换成磷酸?

    pear1213(pear1213) 发表:安捷伦的1100和1260。
    梯度洗脱,短柱,测试一个样品大约6-8分钟。
    1260主要跟MS联用。
    基线,尤其214基线偏移严重。
    不知道到底是什么原因。一直在尝试改变流动相中甲酸的浓度,可是没有效果。

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  • 32862500

    第16楼2013/04/10

    用磷酸体系做ms 不是很合适吧?

    三人行(jncxyy2012) 发表:甲酸有末端吸收,是否可以换成磷酸?

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  • yulin

    第20楼2013/04/11

    对问题的处理方法上,很实用,谢谢楼主

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  • cminzhen

    第21楼2013/04/11

    三人行老师:
    - 将自动进样器的抽样速度降低到50ul/min以下 (默认值是200ul/min)。如果样品粘度较大,降低抽样速度可以极大地改善粘度较大的样品的进样精度。这个抽样速度在哪改啊,,,可否上个图?

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