液相走蛋白类样品？

网上有很多，例如：牛乳铁蛋白样品纯度的高效液相色谱法.方法 采用Vydac-C4色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:A液:乙腈-水(95:5)(含0.10％TFA),B液:0.10％TFA水溶液;梯度:20min内A液从25％增至75％;流速1.0 mL·min-1;检测波长:220 nm;柱温:25℃;进样量:20 μL。

[quote]原文由 三人行(jncxyy2012) 发表:网上有很多，例如：牛乳铁蛋白样品纯度的高效液相色谱法.方法 采用Vydac-C4色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:A液:乙腈-水(95:5)(含0.10％TFA),B液:0.10％TFA水溶液;梯度:20min内A液从25％增至75％;流速1.0 mL·min-1;检测波长:220 nm;柱温:25℃;进样量:20 μL。[/quot

多谢三人行，这么晚还没睡。

一直以为蛋白用的是类似制备这种大流量的仪器

液相色谱,仪器本身对分子量大小并没有太多限制,主要是在色谱柱上面

色谱柱的主要指标参数里面有个孔径,一般用A上面带个圈来表示,一般有60A,100A,120A等参数,这个就是跟最大通过分子量有关,比如,60A一般会限制在2-5KD,100A一般不建议样品分子量超过5-8KD120A可以到10KD

如果要做10KD出头的的小蛋白,就要用到前面有人提到过的那种VYDAC的色谱柱,这种色谱柱,孔径是300A的,所以可以做到20-50KD的分子量,VYDAC是一个专业从事生物小分子分离技术的公司,现在被GRACE收购了,跟ALLTECH现在属于一个集团,其他色谱品牌也有300A的填料,这个都是可以做几十KD分子量的蛋白分离

如果要做更大的蛋白,那么就不能用这种硅胶基的色谱柱了,需要用到凝胶色谱,GPC,他一般是以葡聚糖或者其他的凝胶来作为填料,用分子量过滤的分离方式来进行色谱分离,分子量最大可以做到2MD左右

多谢多谢，学习了。richies技术知识储备很足啊！特别大的分子量的我了解GE公司有几个AKTA的仪器可以做

主要还是要多冲柱子的，最好加上保护住