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液相色谱的进样溶液

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  • 液相色谱的时候,我们通常强调进样溶液用流动相稀释、定容。

    有的时候我们随意一点,直接拿水或纯有机相稀释、定容,进样后对峰型和灵敏度也没什么影响,有的时候,这种影响是很严重的。

    前几天,做了下展青霉素,流动相为水-乙腈(90:10),柱子为C18柱,紫外285nm检测。定溶液的影响就是属于影响很大的那一类。配制了有机溶剂含量不同的系列标准溶液进样。见下面的谱图,谱图中两个峰分别为5-羟甲基糠醛和展青霉素。

    纯水



    5%甲醇



    10%甲醇



    20%甲醇



    30%甲醇



    40%甲醇



    50%甲醇



    60%甲醇



    随着有机相比例的增加,峰型逐渐变的矮胖,最后变成馒头一样。

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  • tangtang

    第1楼2013/06/13

    流动相是水-乙腈,用乙腈溶液会不会好一点?

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  • fengmo4668

    第2楼2013/06/14

    得出一个结论:水的比例越接近流动相的比例越好,可能是这样的时候,与流动相的基线最相近,不像60%甲醇的时候,与流动相混合的时候,会有一个明显的释放气泡的过程。

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  • fengmo4668

    第3楼2013/06/14

    确认一下,菜头的进样量是多少呢?

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  • 菜头

    第4楼2013/06/14

    UPLC,流量为0.3ml,进样量为5微升。

    fengmo4668(fengmo4668) 发表:确认一下,菜头的进样量是多少呢?

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  • 菜头

    第5楼2013/06/14

    昨日实验做完,还有点时间,就发了一帖。
    版内原创太少,抛砖引玉,惟愿版内气氛更活跃些。
    原创无论多少,有意皆可成文。经验总结、实验偶得都行。
    本帖也是实验中一点现象而已。

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  • vcningmeng

    第6楼2013/06/14

    非常好的实验现象,在实验过程中也碰到过,但没有去总结。标准溶液定容很重要,不然对结果影响非常大

    菜头(laohutushen) 发表:昨日实验做完,还有点时间,就发了一帖。
    版内原创太少,抛砖引玉,惟愿版内气氛更活跃些。
    原创无论多少,有意皆可成文。经验总结、实验偶得都行。
    本帖也是实验中一点现象而已。

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  • vcningmeng

    第7楼2013/06/14

    以前做过苏丹红的实验,国标中标准溶液是用正己烷配置的,进样出来的峰很小;最后用流动相配置,一切OK

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  • 上海安谱

    第8楼2013/06/14

    是因为释放气泡导致的吗?还是因为其他原因啊?

    fengmo4668(fengmo4668) 发表:得出一个结论:水的比例越接近流动相的比例越好,可能是这样的时候,与流动相的基线最相近,不像60%甲醇的时候,与流动相混合的时候,会有一个明显的释放气泡的过程。

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  • fengmo4668

    第9楼2013/06/14

    UPLC的流速怎么这么小?

    菜头(laohutushen) 发表:UPLC,流量为0.3ml,进样量为5微升。

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  • 菜头

    第10楼2013/06/17

    UPLC最常用的流量就是0.3了。

    fengmo4668(fengmo4668) 发表:UPLC的流速怎么这么小?

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