食品安全与危害的存在
工业色素的测定
简介
工业色素是工业染色用品，主要用于纤维、棉纺织品、毛纺织品的染色,还用于纸张、皮革、塑料、木器、墨水、油漆等的着色。而不是食品着色剂或添加剂，在食品行业内有严格的要求，禁止使用。
现在随着社会经济的高速发展，国民的收入和生活水平的不断提高，对食品状况的要求也越来越高，主要表现在对其营养成分、色泽、口感、保质期、性状等方面。
某些不法经销商为了增加市场的竞争力，最求利润最大化，在我们喜欢的某些食品中添加了更为廉价的工业色素，其中糕点类、卤制品类、灌制品类、辣椒面等食品中常有添加。
工业染料对消费者身体的危害程度不一样，有的危害小一些，有的危害还是很大的，大都具有致癌性，对皮肤黏膜、呼吸道、食道等器官具有较强的刺激及伤害，可引起消化系统刺激症状。
食品中一旦添加了工业色素，就有危害消费者身体健康的可能。为了维护消费者的利益，为了保证市场的健康发展，对于此类违法犯罪分子及事件我们一定要坚决杜绝，严厉打击。
食品安全问题心系民生，人人有责，我们一定要做好防范、监督、举报、制止、惩罚及宣传教育等工作。
对于我们实验室的工作者我们一定要做好我们的测试、分析等工作，不断提高我们自生的专业技能水平，不断开发、完善先进、快速、方便、准确的检测方法。
实验检测部分
测定范围
辣椒粉中酸性黄、酸性橙、碱性嫩黄、碱性橙和碱性玫瑰精（又称罗丹明B，玫瑰红B,碱性玫瑰精，花粉红）。
应用方法
高效液相色谱法
方法简介
本方法采用高效液相色谱法测定辣椒粉及其制品中酸性黄、酸性橙Ⅱ、碱性嫩黄O、碱性橙、碱性玫瑰精的检测方法。
方法最低检出限分别为：酸性黄：0.03μg/g，酸性橙II 0.02μg/g，碱性嫩黄O 0.03μg/g，碱性橙 0.03μg/g，碱性玫瑰精 0.01 μg/g。
实验部分
原理
试样中的目标化合物经乙腈:水超声波超声提取，进样后经高效液相色谱C18柱分离，紫外检测器检测，保留时间定性，外标法定量计算。
试剂与标准品
甲醇（色谱纯）
乙腈（色谱纯）
乙酸铵（分析纯）
无水乙酸（分析纯）
水（超纯水或二次蒸馏水）
标准物质：酸性黄、酸性橙Ⅱ、碱性嫩黄O、碱性橙、碱性玫瑰精标准品， 纯度>98.5%
标准储备液：
准确称取0.1000g 酸性黄、酸性橙Ⅱ、碱性嫩黄O、碱性橙、碱性玫瑰精标准品于100mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，所得标准储备液浓度为1.00mg/mL，备用。
提取液：乙腈：水=70：30（V:V）
仪器与设备
L600高效液相色谱仪（配备有紫外检测器、二元高压输液泵、柱温箱、在线脱气机、自动进样器）
高速离心机：10000r/min以上
超声波清洗器
分析天平：灵敏度0.0001g
溶剂过滤器及配套设备：0.45或0.22um微孔滤膜（水系、有机系）
0.22um针筒式过滤器（水系、有机系）
漏斗过滤器装置及定性滤纸
样品处理
准确称取1g辣椒粉样品于50mL塑料离心管中，加入10mL提取液，超声提取10min后，以4000r/min离心10min，取上清液漏斗过滤器装置过滤后经0.22μm针式过滤器过滤后，准备上机测定。
色谱条件
色谱柱：Venusil-C18色谱柱，4.6×250mm，5μm；
柱温：35℃；
进样量：10μL
总流速：1.0mL/min
流动相：A：10mM乙酸铵水溶液（乙酸0.12％）；
B：乙腈
梯度洗脱表:
时间（min） | A% | B% |
0 | 70 | 30 |
24 | 30 | 70 |
25 | 30 | 70 |
26 | 70 | 30 |
35 | 70 | 30 |
检测波长：
时间（min） | 波长（nm） |
0 | 484 |
21 | 550 |
30 | 484 |
对照品色谱图
以20ppm标准品色谱图为例。对照品色谱图如上所示。
标准曲线
分别吸取0.1、0.5、1.0、2.0、5.0mL酸性黄、酸性橙Ⅱ、碱性嫩黄O、碱性橙、碱性玫瑰精的标准储备液到100mL容量瓶中用水定容至刻度，五种组分的标准系列为：1、5、10、20、50 μg/mL。
结果计算
根据以下公式计算各化合物含量
R：样品中待测组分的含量，单位为微克每克（μg/g）；
C：标准溶液中测组分的测定浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）；
M：样品重量，单位为克（g）。
方法验证
线性测试
上图显示了5点不同浓度的标样色谱图比较，为了视觉效果，保留时间和吸光度绝对值有位置上的移动。
各化合物标准线性分别如下图所示：
各化合物线性相关系数R均在0.9998-1.0000之间
重复性测试
6次同一20ppm标准品测试谱图的结果如上图所示（为保证一致性，更换波长后未校零）。
6次测试的定性定量重复性结果如下表：
项目 | 化合物 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | RSD% |
Tr （min） | 酸性黄 | 2.61 | 2.57 | 2.58 | 2.58 | 2.59 | 2.60 | 0.57 |
酸性橙II | 11.12 | 11.13 | 11.15 | 11.12 | 11.09 | 11.10 | 0.19 |
碱性嫩黄 | 13.50 | 13.56 | 13.55 | 13.60 | 13.52 | 13.62 | 0.33 |
碱性橙 | 19.85 | 19.88 | 19.80 | 19.73 | 19.75 | 19.91 | 0.36 |
碱性玫瑰精 | 21.35 | 21.24 | 21.28 | 21.37 | 21.26 | 21.31 | 0.24 |
A （mAu·s） | 酸性黄 | 331.7 | 329.6 | 331.5 | 333.2 | 331.4 | 330.5 | 0.37 |
酸性橙II | 563.3 | 562.8 | 561.9 | 563.5 | 562.7 | 560.0 | 0.23 |
碱性嫩黄 | 1113.9 | 1114.1 | 1112.3 | 1115.5 | 1118.8 | 1116.9 | 0.21 |
碱性橙 | 685.5 | 681.9 | 684.2 | 683.7 | 687.6 | 684.8 | 0.28 |
碱性玫瑰精 | 2852.5 | 2832.6 | 2829.3 | 2825.5 | 2834.4 | 2831.2 | 0.33 |
从上面结果可以看出，各化合物保留时间重复性在0.19%-0.57%之间，峰面积重复性在0.4%-0.9%之间，符合要求。
最小检出限
仪器检出限测试谱图如上所示，以2倍噪声峰高对应浓度为检出限计算，图中各化合物浓度分别是：酸性黄0.20ppm，酸性橙0.20ppm，碱性嫩黄0.10ppm，碱性橙0.20ppm，碱性玫瑰精0.07ppm。
样品测试
典型的样品谱图如下图所示：
某厂家辣椒粉样品平行取两份，根据上述中方法处理后，进样，测试色谱图如下图所示
加标回收率
用加标回收率来衡量方法的准确度
以样品1为例，典型的加标谱图和原始谱图对比如下图所示：
各样品的加标回收率计算结果如下表所示：
化合物 | 编号 | 初始含量（mg/L） | 加标量（mg/L） | 测量值（mg/L） | 加标回收率% |
酸性黄 | 1 | 0 | 5 | 3.86 | 77.24 |
0 | 20 | 16.77 | 83.83 |
0 | 50 | 35.78 | 71.57 |
2 | 0 | 5 | 3.60 | 72.08 |
0 | 20 | 15.88 | 79.38 |
0 | 50 | 37.59 | 75.18 |
酸性橙II | 1 | 0 | 5 | 4.71 | 94.24 |
0 | 20 | 18.03 | 90.17 |
0 | 50 | 43.76 | 87.52 |
2 | 0 | 5 | 5.02 | 100.46 |
0 | 20 | 18.29 | 91.47 |
0 | 50 | 45.29 | 90.58 |
碱性嫩黄O | 1 | 1.48 | 5 | 5.77 | 85.78 |
1.48 | 20 | 20.03 | 92.75 |
1.48 | 50 | 46.38 | 89.80 |
2 | 1.72 | 5 | 5.83 | 82.22 |
1.72 | 20 | 19.52 | 88.99 |
1.72 | 50 | 45.33 | 87.22 |
碱性橙 | 1 | 0 | 5 | 5.06 | 101.16 |
0 | 20 | 19.63 | 98.15 |
0 | 50 | 47.03 | 94.06 |
2 | 0 | 5 | 5.16 | 103.16 |
0 | 20 | 17.76 | 88.80 |
0 | 50 | 44.35 | 88.70 |
碱性玫瑰精 | 1 | 0 | 5 | 5.38 | 107.56 |
0 | 20 | 18.65 | 93.25 |
0 | 50 | 46.33 | 92.66 |
2 | 0 | 5 | 5.35 | 106.96 |
0 | 20 | 19.04 | 95.20 |
0 | 50 | 43.87 | 87.74 |
有上表可见，除酸性黄外，各化合物加标回收率在82%-108%之间，符合要求。酸性黄由于有相关物质干扰不能准确定量，只能做定性判断。
方法检出限
在处理样品中加入相当于1μg/mL的各化合物，经同样处理过程测试，谱图如下：
以2倍噪声峰高对应浓度为检出限计算，可知各化合物方法检出限（称样量以5g计算）分别为：
化合物 | 峰高 | 噪声 | 浓度 | 方法检出限（mg/kg） |
酸性黄 | 2.154 | 0.242 | 1.00 | 0.44 |
酸性橙II | 2.582 | 0.242 | 1.00 | 0.38 |
碱性嫩黄 | 9.903 | 0.242 | 2.50 | 0.24 |
碱性橙 | 3.034 | 0.242 | 1.00 | 0.36 |
碱性玫瑰精 | 12.894 | 0.242 | 1.00 | 0.076 |
结论
1. 根据以上分析，本方法适用于辣椒粉中酸性黄、酸性橙Ⅱ、碱性嫩黄O、碱性橙、碱性玫瑰精的定性测定和酸性橙Ⅱ、碱性嫩黄O、碱性橙、碱性玫瑰精的定量测定。
2. 选择484nm和550nm的检测波长，成功的提高了检出限，躲开了山梨酸、苯甲酸等添加剂的干扰。
3. 本方法属于创新优化方法，补充解决了以上混合非法添加工业色素暂无检验标准的问题，在检测相关样品时可供参考借鉴。
4. 优化了前处理方法，简化了处理过程，提高了测试效率及效果。
5. 本方法操作简单、。方便，结果准确、可靠。
6. 为检测提供依据，防范、制止类似违法犯罪事件的发生。
说明
1. 为了改善食品的营养成分、色泽、口感、保质期、性状等在食品生产过程中需要添加某些食品添加剂，如改善色泽的色素，改善口感的甜味素、香精等，提高保质期的防腐剂等。
2. 食品添加剂在某些食品生产中允许添加，但添加物、添加量得符合相应规定，在允许范围内添加，不得超标。超标添加或乱添加就是违法添加甚至犯罪。
3. 工业原料多数都不是食品添加剂，如工业色素、工业塑化剂等。不是食品添加剂的物质坚决杜绝在食品中添加，否则就是违法或犯罪。
4. 多数食品添加剂对身体都有害无益，尽量少添加，少食用，尤其是婴幼儿食品。
5. 色素的检测和违规添加的惩处都很重要，必须两手都要抓，两手都要硬。
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