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由缓冲盐所致的柱压波动问题的解决方案

小猪飞飞

2013/10/31
药物分析

液相色谱（LC）

最近有个项目要用到缓冲盐，参考了某篇文献，用的是0.033mol/L磷酸二氢钾。仪器是Agilent1200，有A、B、C、D四通道，A为0.033mol/L磷酸二氢钾，C为水，D为乙腈。当C:D=20：80时，柱压稳定，波动<1bar。问题来了，实验中以20:80的A:D作为流动相等度洗脱，发现保留时间不稳定，峰形变化较大、柱压波动较大。当A:D=20：80时，柱压波动范围在30~90bar之间。

如图，峰形较宽、保留时间漂移：

C:D通路时，压力正常：

A:D通路时，压力不稳：

咨询Agilent工程师：

1、初步判断：缓冲盐导致主动阀阀芯堵塞。处理方法如下：

（1）首先判断色谱柱对压力波动是否产生影响。将色谱柱前端与管线分离，观察柱压波动情况。结果因柱压较低，压力单位以bar表示，因此无法判断压力波动大小的情况。

（2）关闭泵电源，拔掉主动阀与仪器间的白色电缆线，去掉peek管线，用Agilent专用工具包中的扳手取下主动阀，并将塑料滤芯取下。用60℃以上的热水超声清洗1分钟，再用甲醇超声1分钟，这两步的超声时间不宜过久。

如图，左下角部分是主动阀：

拆下主动阀，主动阀上部是塑料阀芯

小心拆下塑料阀芯，超声清洗（严格控制时间）：

装上主动阀，发现压力波动依旧存在：

2、工程师建议用60℃以上的热水，装入流动相的瓶子，冲洗管路，以5ml/min的流速，不接柱冲洗约20min，再换上0.033mol/L缓冲盐，发现柱压稳定。

峰形、保留时间恢复正常：

小结：

1、可以先尝试用热水冲洗管路，因为用C:D时未发现波动，因此主动阀可能不存在问题，问题还是在A通道本身。

2、缓冲盐用过的管路，最好用纯水（需要时用热水）定期冲洗。

3、在超声清洗主动阀阀芯时，时间要控制好，防止损伤阀芯。

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三人行

第1楼2013/11/01

等度洗脱用单泵效果好。

0

小猪飞飞

第2楼2013/11/01

嗯，一般用两通道没什么问题，这种情况还是第一次遇到，平时不太用磷酸二氢钾作为缓冲盐
三人行(jncxyy2012) 发表:等度洗脱用单泵效果好。

0

三人行

第3楼2013/11/01

用完缓冲盐一定要清洗干净。
小猪飞飞(zpf20031212) 发表:嗯，一般用两通道没什么问题，这种情况还是第一次遇到，平时不太用磷酸二氢钾作为缓冲盐

0

zgylucky

第4楼2013/11/01

有机相比例太高会导致缓冲盐在管路中析出。

0

小猪飞飞

第5楼2013/11/01

请教0.033mol/L的磷酸二氢钾浓度高吗？
三人行(jncxyy2012) 发表:用完缓冲盐一定要清洗干净。

0

三人行

第6楼2013/11/01

还可以，不低了。
小猪飞飞(zpf20031212) 发表:请教0.033mol/L的磷酸二氢钾浓度高吗？

0

精
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千层峰

第7楼2013/11/01

很多LC上面的堵塞，都是由缓冲液造成的。

0

wulin321

第8楼2013/11/01

应助达人

用热水冲洗是天气原因吗

0

碌碌阿峰

第9楼2013/11/01

乙腈和缓冲盐体系接触的时候，盐析现象严重，可以在分析实验尝试一下，乙腈和多少配比的缓冲液接触的时候会后盐析的现象，再配置流动相进行分析

0

小猪飞飞

第10楼2013/11/01

热水应该是促进盐的溶解
wulin321(wulin321) 发表:用热水冲洗是天气原因吗

0

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