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关于安捷伦电泳仪的基线毛刺和峰形拖尾问题

毛细管电泳(CE)

  • 用的是安捷伦的毛细管柱子,自己截的以及烧制的窗口,活化步骤是先用0.5M NaOH溶液冲洗10min,超纯水冲洗60min,0.1M HCl溶液冲10min,超纯水冲30min,pH2.5、30mM的磷酸缓冲液冲30min,溶液均过0.2微米的膜,冲洗的过程中基线还不错,但是进样的时候基线的毛刺就挺明显的,想求助各位大神是什么原因呢?

    看以前的帖子,建议说清洁检测窗口,想请问一下具体应该怎么清洁呢?跪谢啦~



    今天进样的时候,用的是超声的缓冲液,毛刺现象还在,而且峰形有很严重的拖尾,这个浓度是50ppm,之前进的10ppm的也有拖尾,感觉应该不是浓度的问题,求助各位造成基线毛刺和峰拖尾的原因以及解决办法
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  • v2812644

    第1楼2013/11/07

    基线的毛刺有几个方面的原因,请逐一排查:

    1。检测窗口不干净。特别是自己烧制的窗口。推荐方法可以用两小块铝箔包住要烧制的窗口两边的位置以保护涂层,中间留出大约2~3mm的空间,然后拿打火机一燎,发现涂层红了就立即拿开打火机。然后用酒精棉或者蘸水的镜头纸擦去烧黑的涂层即可。当然你可以采用电阻丝的方法来烧制窗口。在烧红的电阻丝上面滚一圈就好。也很方便。

    2。氘灯能量不足。这个可以通过灯能量测试来考察。表现为基线的波动较大且频繁。

    3。缓冲溶液中有气泡。这个可以通过超声,或者在毛细管两端加压的方式解决。

    BTW: 毛细管活化的建议步骤:1M NaOH 冲洗10min, 静置10min,水冲洗10min。搞定。根本不需要那么复杂步骤。我从99年开始做电泳,一直都是如此的。

    dates(dates) 发表:用的是安捷伦的毛细管柱子,自己截的以及烧制的窗口,活化步骤是先用0.5M NaOH溶液冲洗10min,超纯水冲洗60min,0.1M HCl溶液冲10min,超纯水冲30min,pH2.5、30mM的磷酸缓冲液冲30min,溶液均过0.2微米的膜,冲洗的过程中基线还不错,但是进样的时候基线的毛刺就挺明显的,想求助各位大神是什么原因呢?
    看以前的帖子,建议说清洁检测窗口,想请问一下具体应该怎么清洁呢?跪谢啦~

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  • beyond1977

    第2楼2013/11/08

    应助达人

    上张图谱看看

    dates(dates) 发表:用的是安捷伦的毛细管柱子,自己截的以及烧制的窗口,活化步骤是先用0.5M NaOH溶液冲洗10min,超纯水冲洗60min,0.1M HCl溶液冲10min,超纯水冲30min,pH2.5、30mM的磷酸缓冲液冲30min,溶液均过0.2微米的膜,冲洗的过程中基线还不错,但是进样的时候基线的毛刺就挺明显的,想求助各位大神是什么原因呢?
    看以前的帖子,建议说清洁检测窗口,想请问一下具体应该怎么清洁呢?跪谢啦~

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  • v2812644

    第3楼2013/11/08

    通过你的图谱,我可以排除溶液气泡的因素。

    我个人建议你,首先检查和清洗毛细管窗口。如果没问题的话,做一下灯能量测试,Agilent的工作站里面有这样的功能的,如果你不会可以问我。

    关于峰拖尾,这是由于化合物和毛细管壁有相互作用。能否告知你的化合物名称,以及采用的缓冲溶液体系。也可以私信我。

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  • wy20071722

    第4楼2013/11/08

    还有可能是管子活化的不充分。

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  • ericwong

    第5楼2013/11/11

    峰拖尾有可能是因为吸附,将毛细管好好处理一下试试

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  • nini2006

    第6楼2013/11/11

    这个帖子可能对你有帮助:
    http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20130805/4889933/

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  • dates

    第7楼2014/01/18

    多谢大家的帮助,我的问题已经解决了,因为我用的是酸性的缓冲溶液,然后我在每一针中间都用氢氧化钠冲了2分钟,所以导致了pH不稳定,造成了拖尾,去掉了冲洗,峰形就好多了。
    然后基线的问题,我发现还是窗口的问题,重新烧了窗口,基线恢复了~

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  • CEcret

    第8楼2014/01/19

    一定要避免两针之间冲洗的时候毛细管壁的pH剧烈变化,会造成结果的不稳定的。基线的问题多半都是窗口没对准或者氘灯太久了。

    dates(dates) 发表:多谢大家的帮助,我的问题已经解决了,因为我用的是酸性的缓冲溶液,然后我在每一针中间都用氢氧化钠冲了2分钟,所以导致了pH不稳定,造成了拖尾,去掉了冲洗,峰形就好多了。
    然后基线的问题,我发现还是窗口的问题,重新烧了窗口,基线恢复了~

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  • dates

    第9楼2014/01/19

    对滴对滴,还好我的这些问题都是窗口的问题,不过我用的这台仪器的氘灯也用了好久了,希望它还能坚持坚持啊~

    CEcret(v2812644) 发表:一定要避免两针之间冲洗的时候毛细管壁的pH剧烈变化,会造成结果的不稳定的。基线的问题多半都是窗口没对准或者氘灯太久了。

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  • beyond1977

    第10楼2014/01/29

    应助达人

    是窗口没做好还是有脏东西附在上面,总之问题解决了就好

    dates(dates) 发表:对滴对滴,还好我的这些问题都是窗口的问题,不过我用的这台仪器的氘灯也用了好久了,希望它还能坚持坚持啊~

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