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LC-ESI-MS研究蛋白质复合物

液质联用(LCMS)

  • LC-ESI-MS研究蛋白质(多聚体)复合物的实验中,LC用水作流动相,蛋白质及复合物带太多水分子而使质谱图复杂,而不易看到蛋白质和小分子配体的结合,而用酸水作流动相,又常遇到蛋白复合物被破坏的问题,请问有没有好的分析策略?
    向各位请教啦,谢谢!

    从图上可以看出右方四聚体部分的多电荷质谱图复杂,带有较多水分子。
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  • 八杯水

    第1楼2013/11/14

    没做过蛋白质。帮顶,等高人……

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  • 纯粹

    第2楼2013/11/14

    蛋白质一般的流动相都是选甲酸和乙腈吧?不过用纯水也可以!

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  • chrushcc

    第3楼2013/11/14

    你的蛋白是多少kd的?加水没事啊,你算的时候加上18就好了啊。前面那几个簇峰看起来像蛋白。蛋白一般都是正离子模式。用纯水离子化会比较差,直接进样推荐你用50%乙腈(或甲醇),50%水,加上0.1%的FA。走梯度的话,用0.1%的FA的水和乙腈。

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  • wang45695

    第4楼2013/11/15

    这个蛋白是四聚体蛋白,分子量55kDa, 质谱图中右边是四聚体多电荷峰,保持了主要的生理活性,用于研究蛋白质和小分子配体的结合,左边低质荷比端是蛋白质单体峰,我也用过甲醇或乙腈做流动相,很难得到四聚体蛋白峰,好像都解离为单体了,所以给研究带来了麻烦

    !

    为了保持蛋白质稳定的四聚体结构才用水做流动相,但离子化效率很低很低,后来我只用0.05%(含醋酸)做流动相,离子化效率稍微增加,但研究蛋白质复合物好像也有问题,因为测了0.05%(含醋酸)的PH为3.45,该条件下蛋白质复合物恐怕已经解离了。

    谢谢 chrushcc 的回答,还望指点!

    chrushcc(chrushcc) 发表:你的蛋白是多少kd的?加水没事啊,你算的时候加上18就好了啊。前面那几个簇峰看起来像蛋白。蛋白一般都是正离子模式。用纯水离子化会比较差,直接进样推荐你用50%乙腈(或甲醇),50%水,加上0.1%的FA。走梯度的话,用0.1%的FA的水和乙腈。

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  • chrushcc

    第5楼2013/12/03

    我大概算了一下,你后面那串峰54kd左右,跟你要的目标蛋白挺接近的。其实不是所有的单蛋白都能形成很好的簇峰,你还要保持多聚体,很不好做。你直接用针泵喷的,还是加柱子了?推荐你试一下EESI,你可以查下文献看一下,我以前用过这个源,但是没用来做过蛋白。你可以用一个ESI通道直接甲醇水加电,提供电子,另外一个喷你的蛋白溶液。

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