ELISA试剂盒实验之如何选择最优化的包被条件

hysw

2013/11/25

私聊

分析化学

ELISA试剂盒实验看似操作简单、便捷，但是每一步科研人员都需要投入百分之百的心血和精力。今天要为您讲解的是ELISA试剂盒实验之如何选择最优化的包被条件。
1.包被抗原的选择
包被抗原可分为天然蛋白、重组蛋白和小分子抗原三大类。天然蛋白需经纯化才能用直接吸附法包被，对于含杂质较多的抗原可以采用间接捕获法包被（先用能够与目的抗原反应的物质如抗体直接吸附在酶标板上，再通过特异性反应使抗原固相化）。经纯化的重组蛋白一般皆可直接包板。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有机化合物，由于分子量太小，往往难于直接吸附在酶标板上，一般都先使其与无关蛋白质如BSA等偶联，偶联物吸附于固相载体上。
2.包被液的选择
一般常用的是pH9.6的碳酸盐缓冲液，如果包被的抗原在碱性条件下不稳定的话，也可以使用pH7.2的磷酸盐缓冲液。
3.包被温度的选择
通常是4-8度条件下过夜或者37度保温2小时，我们强烈建议4-8度条件下包被，有利于蛋白活性的保持。
4.包被浓度的选择
包被的最适浓度随固相载体和包被物的性质变化，一般蛋白质的包被浓度为1-5ug/ml，要明确针对特定包被抗原的最适包被浓度需要通过实验来确定。
包板后需要封闭吗？应该选择什么样的封闭体系？
封闭是否必要，取决于ELISA的模式及具体的实验条件。一般说来，双抗体夹心法，只要酶标记物是高活性的，操作时洗涤彻底，不经封闭也可得到满意的结果。而在间接法测定中，封闭一般是必不可少的。

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平凡人

第1楼2013/11/26

不接触的版友对一些名词不太理解。
大概解释下：
1、免疫原：这个很好理解，就是免疫动物用的蛋白，即目标蛋白。
2、筛选原：免疫动物后，用来筛选抗体用的，一般和免疫原是有点区别的，比如是免疫原上的一个肽段，或其他批次的相同抗原。
3、包被原：就是包被用的蛋白。

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hysw

第2楼2013/11/26

谢谢说明！
平凡人(zhaoyt1979) 发表:不接触的版友对一些名词不太理解。
大概解释下：
1、免疫原：这个很好理解，就是免疫动物用的蛋白，即目标蛋白。
2、筛选原：免疫动物后，用来筛选抗体用的，一般和免疫原是有点区别的，比如是免疫原上的一个肽段，或其他批次的相同抗原。

3、包被原：就是包被用的蛋白。