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肝素生物检定法
张庆VIP
2013/12/24
私聊
前处理综合讨论
本法系比价肝素标准品(
S
)与供试品(
T
)延长新鲜兔血或兔、猪血浆凝血时间的作用,以测定供试品的效价。
标准品溶液的制备:精密称取肝素标准品适量,按标示效价加灭菌注射用水溶解使成每
1ml
中含
100
单位的溶液,分装于适宜容器内,
4
~
8
℃贮存,经验证保持活性符合要求的条件下,可在
3
个月内使用。
标准品稀释液的制备
试验当日,精密量取标准品溶液,按高、中、低、剂量组(
ds3
、
ds2
、
ds1
)用氯化钠注射液配成三种浓度是稀释液,相邻浓度比值(
r
)相等;调节剂量使低剂量各管的平均凝血时间相等,用新鲜兔血者,以不超过
60
分钟为宜,其稀释液一般可制成每
1ml
中含肝素
2
~5单位,r为1:0.7左右;用血浆者,以不超过30分钟为宜,其稀释液一般可制成每1ml含肝素0.5~1.4单位,r为1:0.85左右。
供试品溶液与稀释液的制备:按供试品的标示量或估计效价(
AT
),照标准品溶液与稀释液的制备法制成高、中、低(
dT3
、
dT2
、
dT1
)三种浓度的稀释液。相邻两浓度之比值(
r
)应与标准品相等,供试品与标准品各剂量组的凝结时间应相近。
血浆的制备:迅速收集兔或猪血置预先放有
8%
枸橼酸钠溶液的容器中,枸橼酸钠溶液与血液容积之比为
1:19
,边收集边轻轻振摇,混匀,迅速离心约
20
分钟(离心力不超过
1500
×
g
为宜,
g
为重力常数)。立即吸出血浆,并分成若干份分装于适宜容器内,低温冻结贮存临用时置
37
℃
±
0.5
℃水浴融化,用两层纱布或快速滤纸滤过,使用过程
4
~
8
℃放置。
测定法(
1
)新鲜兔血
取管径均匀(
0.8cm
×
3.8cm
或
1.0cm
×7.5cm
)、清洁干燥的小试管若干支,每管加入一种浓度的标准品或供试品稀释液
0.1ml
,每种浓度不少于
3
管,各浓度的试管支数相等。取刚抽出的兔血适量,分别注入小试管内,每管
0.9ml
,立即混匀,避免产生气泡,并开始计算时间。将小试管置
37
℃
±
0.5
℃恒温水浴中,从动物采血时起至小试管放入水浴的时间不超过
3
分钟,注意观察,并记录各管的凝血时间。
(
2
)、血浆
取上述规格的小试管若干支,分别加入血浆一定量,置
37
℃
±
0.5
℃恒温水浴中预热
5
~
10
分钟,依次每管加入一定浓度的标准品或供试品稀释液及
17%
氯化钙溶液,每种浓度不得少于
3
管,各浓度的试管支数相等,血浆、肝素稀释液和氯化钙溶液的加入量分别为
0.5ml
、
0.4ml
和
01.ml
,
,0.8m
、
0.1ml
和
0.1ml
,加入氯化钙溶液后,立即混匀,避免产生气泡,并开始计算时间,注意观察并记录各管凝血时间。将各管凝血时间换算成对数,照生物检定统计法(附录
ⅩⅣ
)中的量反应平行法计算效价及实验误差。
测定法(
1
)的可信限率(
FL%
)不得大于
10%
。
测定法()的可信限率(
FL%
)不得大于
5%
。
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私聊
千层峰
第1楼
2013/12/24
从
气质
转过来了,觉得属于样品前处理。
0
发表回复
+关注
私聊
透明
第2楼
2013/12/29
是楼主你的原创吗?
0
发表回复
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