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Direct PCR技术理念
省部重点实验室
2014/02/28
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生命科学仪器综合讨论
PCR(Polymerase Chain Reaction)——聚合酶链式反应发明到现在,已经整整30年了。30年来,经过世界范围内无数学者的不断补充完善,PCR技术已经成为整个生命科学 领域应用最广泛、使用频率最高也是最重要的基础研究手段。在传统PCR技术广泛应用的基础上发展起来的Touch Down PCR、RT-PCR、Real-Time PCR、Multi PCR等以及最新出现的 Digital PCR(数字PCR),极大的丰富了广大科研工作者的研究手段,大大加速了现代生命科学特别是分子生物学的发展进程,为整个人类对生命与自然的研究做出了 巨大贡献。
传统PCR技术以及在此基础上衍生出来的各项新技术新应用,都有一个前提,就是需要事先获得高纯度的核酸模版。任何生物学样本,都需要经过一些列复杂繁琐的样品处理,才能够获得符合PCR技术要求的核酸样本。DNA与RNA的分离提取一直以来都是相关科研技术人员每天需要不断重复的基础工作。由于样品之间的巨大差异,DNA与RNA的分离提取过程也千差万别,这项工作对于操作人员的技术熟练程度要求颇高。传统分离提取技术 由于要使用一些毒性较强的化学试剂,长期接触,将对操作人员的身体造成不可逆的伤害,甚至在实验过程中造成直接的损害。酚氯仿等化学试剂已经被证明是实验 室重要致癌物质,在植物组织核酸分离提取过程中使用的液氮则由于其超低的温度,在实验过程中对操作人员的安全形成了较大威胁。
同时,对于有大量样品需要研究的人员,分离提取核酸则是一项劳动量极大的工作。现在市场上核酸分离提取试剂盒已经成熟,品牌众多,但大致都相同。无论是硅胶膜柱离心式试剂盒还是磁珠法试剂盒,都需要大量的时间,且成本高昂。除试剂盒成本外,更是对实验室仪器设备有特殊要求,磁珠法所采用的自动化工作站就是非常典型的大 型高价值设备,对实验室而言,是一项巨大的费用支出。
综上所述,在进行PCR实验之前,样品的预处理是科研人员难以避免并一直头疼的一项工作。如何解决此难题,能否不经核酸的分离提取进行PCR实验,一直是广大科研人员及临床检验人员所思考的。
急人所急,想人所想,福际生物经过数年潜心研究的Direct PCR技术及相关试剂盒,成功突破众多瓶颈限制,以极强的抗逆性和适应性,针对诸多种类的不同样品成功实现直接PCR,让科研人员从此摆脱核酸分离提取的 繁琐和危险,大大降低大家的劳动强度、加快实验进程、节约科研和检测成本。
以下,是福际生物对Direct PCR的理解和认识。
第一、Direct PCR技术是针对各类生物样品组织的直接PCR技术。该技术条件下,无需对核酸进行分离提取,直接以组织样本为对象,加入目标基因引物进行PCR反应。
第二、Direct PCR技术不仅仅是传统的DNA模版的扩增技术,也包含RNA模版的逆转录PCR。
第三、Direct PCR技术不仅仅是直接对组织样本进行常规定性PCR反应,还包括Real-Time qPCR反应,这就要求反应体系具备极强的抗背景荧光干扰能力以及对内源性荧光淬灭剂的拮抗能力。
第四、Direct PCR技术针对的组织样本,只需要核酸模版的释放,并不对干扰PCR反应的蛋白、多糖、盐离子等进行去除,这要求反应体系中的核酸聚合酶和PCR Mix具有极佳的抗逆性和适应性,能够在复杂的条件下保证酶活性和复制准确性。
第五、Direct PCR技术针对的组织样品未经任何核酸富集处理,模版量极少,这就要求反应体系有极高的灵敏度和扩增效率。、
福际Direct PCR技术及相关试剂盒完全符合以上几点要求,将PCR前处理过程化繁为简,让PCR实验变得简便快捷。
Direct PCR技术是PCR技术诞生30年来最重要的技术拓展和创新之一,福际生物已经并将继续成为这一技术的领导者和创新者。Direct PCR技术的应用前景十分广阔,该技术的不断完善和推广必将给科研和检验工作带来颠覆性的改变,这是一场PCR技术革命。
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