【求助】如何再生菲罗门c18柱？

markyiqi

2014/05/26

私聊

液相色谱（LC）

赏
悬赏金额:10积分状态:已解决

最近在走一个生物样品，处理出来的样品，用流动相溶解不好，有白色混悬物，进样后，柱子柱压很高，初步判断为柱前端堵了，用甲醇，异丙醇反冲，柱压没降，不知道怎么再生

袖剑 2014/05/27

[quote]原文由 [b]markyiqi(v2851394)[/b] 发表: [font=宋体]最近在走一个生物样品，处理出来的样品，用流动相溶解不好，有白色混悬物，进样后，柱子柱压很高，初步判断为柱前端堵了，用甲醇，异丙醇反冲，柱压没降，不知道怎么再生[/font][/quote]你做的是生物样品，里面的蛋白或多肽可能会导致堵塞。清洗程序（将色谱柱按下面程序进行反冲）：如含有缓冲盐，先用20个柱体积的流动相冲洗将其除去；再按下面的梯度条件，运行两次： A： 0.1%TFA的水溶液 B：0.1%TFA加入到乙腈/异丙醇（1:2）中梯度条件：B相25%到100%，30min 最后用10倍柱体积的流动相平衡，不要将色谱柱保存在含有TFA的溶液中

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e_liang369

第1楼2014/05/26

拆开柱头清洗筛板

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支点

第2楼2014/05/26

应助达人

可以使用超声清洗筛板，然后低流速长时间冲洗色谱柱，关键是看你的样品在什么条件下溶解度较好。

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三人行

第3楼2014/05/26

清洗柱塞板，如果填料被污染还要更换入口端的少许填料，供试液进样前一定要过滤。

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袖剑

第4楼2014/05/27

你做的是生物样品，里面的蛋白或多肽可能会导致堵塞。清洗程序（将色谱柱按下面程序进行反冲）：如含有缓冲盐，先用20个柱体积的流动相冲洗将其除去；再按下面的梯度条件，运行两次：

A： 0.1%TFA的水溶液

B：0.1%TFA加入到乙腈/异丙醇（1:2）中

梯度条件：B相25%到100%，30min

最后用10倍柱体积的流动相平衡，不要将色谱柱保存在含有TFA的溶液中
markyiqi(v2851394) 发表:最近在走一个生物样品，处理出来的样品，用流动相溶解不好，有白色混悬物，进样后，柱子柱压很高，初步判断为柱前端堵了，用甲醇，异丙醇反冲，柱压没降，不知道怎么再生