仪器信息网APP
选仪器、听讲座、看资讯

有做单抗CE-SDS分析的大侠吗?几个问题求教

毛细管电泳(CE)

  • 先上beckman试剂盒说明书上的两张图



    还原条件



    非还原条件

    几个疑问,大家一起来讨论下

    1 非还原条件下并没有加入巯基乙醇,为什么还会出个和还原条件下差不多大小的巯基乙醇峰呢?

    2 资料说明NG=非糖基化重链,那非还原条件下NG是否应该更准确的表达为非糖基化的完整抗体?

    3 按理说NGHC(非糖重链)和 NG-IgG(非糖完整抗体)含量应该相当,但是为何所有实验 NG-IgG含量均>NGHC?

附件:

  • 该帖子已被版主-nini2006加5积分,加2经验;加分理由:发帖
    +关注 私聊
  • CEcret

    第1楼2014/07/21

    回复你的问题,如下:

    1。根据我手头的资料,MT10.5min的位置并没有标注任何说明。见附件P31-P32。事实上这个位置也不是巯基乙醇。

    2。非还原条件下的NG准确表达为非糖基化的抗体蛋白。(即完整抗体蛋白切除糖基后的产物,注意这里已经不是完整抗体蛋白了)

    3。你是通过绝对峰面积比较的吧?这里NG-IgG的含量确实应当与NGHC相当,你需要采用校正峰面积(即峰面积/迁移时间)来比较。

3
  • 该帖子已被版主-nini2006加4积分,加2经验;加分理由:应助
    +关注 私聊
  • zyma_100

    第2楼2014/07/22

    十分感谢,看来Beckman的资料还是需要改进的

    CEcret(v2812644) 发表:回复你的问题,如下:

    1。根据我手头的资料,MT10.5min的位置并没有标注任何说明。见附件P31-P32。事实上这个位置也不是巯基乙醇。

    2。非还原条件下的NG准确表达为非糖基化的抗体蛋白。(即完整抗体蛋白切除糖基后的产物,注意这里已经不是完整抗体蛋白了)

    3。你是通过绝对峰面积比较的吧?这里NG-IgG的含量确实应当与NGHC相当,你需要采用校正峰面积(即峰面积/迁移时间)来比较。

0
    +关注 私聊
  • momoiro

    第5楼2016/01/29

    我们当时CE培训时,有位老师说的也是,在我们自己的非还原CE-SDS实验中,主峰前分出的肉眼可见的峰是HHL峰,而不是非糖基化抗体的峰。

0
    +关注 私聊
  • Ins_31a63d37

    第6楼2022/08/25

    请教,HHL峰是什么啊?

    momoiro(momoiro)发表:我们当时CE培训时,有位老师说的也是,在我们自己的非还原CE-SDS实验中,主峰前分出的肉眼可见的峰是HHL峰,而不是非糖基化抗体的峰。

0
    +关注 私聊
  • 第7楼2022/10/03

    应助达人

    CESDS更新图,还原和非还原是两种不同的处理方式,还原法重链和非还原法的主峰纯度上没有必然联系

0
猜你喜欢最新推荐热门推荐更多推荐
举报帖子

执行举报

点赞用户
好友列表
加载中...
正在为您切换请稍后...