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黄曲霉毒素各个成分如何确定

  • 小帅at仪器
    2014/10/11
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 各位老师,我这几天在实验室按照2010版药典标准做了黄曲霉毒素的检测。对照品是进口的黄曲霉毒素混标,没有明确各个成分的含量和先后出顺序。下图是对照品色谱图和包装盒

    色谱条件: 色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-乙腈-水(10:18:42)为流动相,流速每分钟0.8ml;采用柱后衍生法检测。衍生溶液为0.05%的碘溶液(取碘0.5g,加人甲醇100ml使溶解,用谁稀释至1000ml制成),衍生化泵流速每挣钟0.3ml衍生化温度70℃;以荧光检测器检测,激发波长λex=360nm(或365nm),发射波长λem=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。

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  • wslmpol

    第1楼2014/10/11

    把你的流动相,仪器条件发上来看看。论坛里之前有人发过黄曲霉毒素出峰顺序,不同的条件出峰顺序不一样,你可以查查看。

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  • 小帅at仪器

    第2楼2014/10/11

    2010版药典 黄曲霉毒素检验法(文字版)
    附录Ⅸ V 黄曲霉毒素测定法
    本法系用高效液相色谱法(附录ⅥD)侧定药材 饮片剂制剂中的黄曲霉毒素(以黄曲霉毒B1、黄曲霉毒索B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2总量计),除另有规定外,按下列方法测定。
    色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-乙腈-水(10:18:
    42)为流动相,流速每分钟0.8ml;采用柱后衍生法检测。衍生溶液为0.05%的碘溶液(取碘0.5g,加人甲醇100ml使溶解,用谁稀释至1000ml制成),衍生化泵流速每挣钟0.3ml衍生化温度70℃;以荧光检测器检测,激发波长λex=360nm(或365nm),发射波长λem=450nm。两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。
    混合对照品溶液的制备 精密量取黄曲霉毒素混和标准品(黄曲霉毒B1、黄曲霉毒索B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2标示浓度分别为1.0ug/ml、0.3ug/ml、1.0ug/ml、0.3ug/ml)0.5ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,作为储备液。精密量取储备液1ml,置25ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,即得。
    供试品溶液的制备 取供试品粉末约15g(过二号筛),精密称定,加氯化钠3g,置于均质瓶中,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速搅拌2分钟(搅拌速度大于11000转/分钟),离心5分钟(离心速度2500转/分钟),精密量取上清液15ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45um)滤过,量取续滤液20.0ml,通过免疫亲和柱(AflaT-est@P),流速每分钟3ml,用水20ml洗脱,洗脱液弃去,使空气进入柱子,将水挤出柱子,再用适量甲醇洗脱,收集洗脱液,置2ml量瓶中,并用甲醇稀释至刻度,摇匀。即得。
    测定法 分别精密吸取上述混和对照品溶液5ul、10ul、15ul、20ul、25ul,诸如 液相色谱仪,测定峰面积,以峰面积为纵坐标,进样量为横坐标,绘制标准曲线,另精密吸取上述供试品溶液20-25ul,注入液相色谱仪,测定峰面积,从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒索B2、黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2的量,计算,即得。

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  • 小帅at仪器

    第4楼2014/10/11

    老师,您好,完全按照上述药典做的

    wslmpol(wslmpol) 发表:把你的流动相,仪器条件发上来看看。论坛里之前有人发过黄曲霉毒素出峰顺序,不同的条件出峰顺序不一样,你可以查查看。

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  • 夏天的雪

    第5楼2014/10/11

    应助达人

    黄曲霉毒素G2/G1/B2/B1,柱后衍生大多都是这个出峰顺序

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  • 夏天的雪

    第6楼2014/10/11

    应助达人

    可以不衍生直接做以区分G2/B2和G1/B1.前两种不衍生出峰也很好,后两者不衍生出峰响应值小

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  • 小帅at仪器

    第7楼2014/10/11

    好的,我试试

    原文由bingwang228发表: 可以不衍生直接做以区分G2/B2和G1/B1.前两种不衍生出峰也很好,后两者不衍生出峰响应值小

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    第8楼2014/10/11

    盒子里应该有个证书啊,我记得是有谱图的

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    第9楼2014/10/11

    查过了,这个标准品的检测是用TLC的方法

    具体的COA请参见附件

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  • wslmpol

    第10楼2014/10/11

    这个条件的话出峰顺序应该如楼下所说。混标浓度不可能没有吧,我之前也用过supelco的黄曲霉混标,应该有COA证书的。

    小帅at仪器(v2856959) 发表:老师,您好,完全按照上述药典做的

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    第11楼2014/10/12

    丢了网站上也可以找到COA的,不怕

    wslmpol(wslmpol) 发表:这个条件的话出峰顺序应该如楼下所说。混标浓度不可能没有吧,我之前也用过supelco的黄曲霉混标,应该有COA证书的。

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