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【急诊部第2季】+ 紫外下的吸收峰

暗夜精灵

2014/12/11

紫外可见分光光度计（UV）

寻找——γ-球蛋白测试波长

关键词：紫外、波长、曲线、中空纤维膜

摘要：现在很多的水处理行业无论是净水、中水回用、污水处理都用到膜，而中空纤维膜已经成为当下的主流产品。膜的作用就是过滤，膜孔的大小直接关系到过滤精度。超滤膜的孔径大小一般用截留分子量表示，即大于截留分子量的物质都将被过滤。

由于目前还没有统一的测试方法，下面个人通过紫外波长测试实验，确认伽马球蛋白的测试波长，以及实验过程中遇到一些问题还请大家帮忙讨论讨论。

一、实验器材

伽马球蛋白、试管、试管架、移液器、烧杯、表面皿、截留装置、秒表、中空纤维膜、紫外分光光度计等（以上玻璃器皿均洗干净）

二、准备实验

1、取中空纤维膜泡在纯水中2h以上。

2、称量1gγ-球蛋白溶解到1L纯水中，配置约1g/L的γ-球蛋白标准溶液。（因为测试结果是截留率，浓度误差对结果影响不大。）

3、分别配置0 g/L、0.1g/L、0.3 g/L、0.5 g/L、0.8 g/L、1 g/L的标准曲线。

4、将1g/L的溶液放到截留装置，设置压力在0.1MPa下进行循环5min，取10ml原液待测。（验证管路污染情况）

1、取浸湿膜60cm放入装置，进行截留，弃5min初始液后取滤出液10ml待测。（重复过程进行平行性实验）

三、图谱分析

1、打开电脑以及紫外分光光度计预热20min，点击图标，进入主页面。（跟上述实验同时进行）

2、点击链接按钮，进行自检。

3、点击光谱图标后点击方法图标，设置方法全谱扫描、中速。

4、放入比色皿进行基线调零。

5、测试零浓度跟最大浓度进行测试（确定波长的范围，小浓度的不明显）

由下图可知：零浓度的在紫外跟近红外区波动在0.0025符合要求，最大浓度值在紫外处有吸收波峰，有较大的灵敏度。

6、根据上图可知溶液在中紫外以下有完整的谱图,因此实验波长范围在（340nm-200nm），按上述方法重新设置波长范围。

7、基线调“0”后放入标准曲线浓度点依次进行测试。如下图所示：

8、放入样品滤液进行测试（虚线带点线条）黑色跟灰色为滤出液，蓝色为循环后的原液。

9、下表为溶液在波长278nm下的吸收值

四、结论

伽玛球蛋白溶液浓度为0.1g/L～1g/L时，在278nm处可以得到较好的实验结果。在213nm左右有最大的吸收，为末端吸收，不成线性。241nm以下比278nm有更好的灵敏度，但是检出限过高，没有吸收峰值。因此在该仪器下伽马球蛋白的最佳吸收波长为278nm。

五、问题：

1、该蛋白质保持温度为零下20摄氏度，温度过高会失效。如果要配置标准溶液需要加热烘干，那么加热后还有用吗？

2、第一条0.1浓度曲线（灰色）为什么跟其他的曲线不一样？

3、网上很多说紫外在210nm以下是末端吸收，那紫外210还有什么用？

4、根据末端吸收的说法是溶剂引起的偏差，那么已经用水调零了，怎么还是有那么大吸收。

5、上述的标准溶液是互不干扰的曲线，但是样品的曲线与标准溶液的曲线会交叉，这是什么原因引起的？

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暗夜精灵

第1楼2014/12/11

问题都写在最后了

0

暗夜精灵

第2楼2014/12/12

专家们来帮帮忙啊

0

dooby

第3楼2014/12/15

这个没遇到过，进来围观

0

暗夜精灵

第4楼2014/12/15

同样表示感谢
dooby(dooby) 发表:这个没遇到过，进来围观

0

荆棘鸟fiona

第5楼2014/12/17

不懂，坐等高手来解答~~

0

小虾米

第6楼2014/12/27

不错，这个检测方法比较实用

0

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