方法不同效果不同,方法决定效果
同一样品检测方法很多,不同方法,效果一般也不一样,有的甚至相差很大。下面我们就用两种高效液相色谱方法检测下滋补佳品蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖。
方法一
样品溶液制备
标准品溶液制备:分别精密称取果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖各0.1g于100ml容量瓶中,加50ml水使之充分溶解,加乙腈至刻度,摇匀,备用。
样品溶液制备:精密称取0.5g样品于100ml容量瓶中,加50ml水使之完全溶解,加乙腈至刻度,摇匀,0.45um有机相微膜过滤后,待测。
色谱条件
检测器:示差折光检测器
色谱柱:氨基柱(5um,4.6 X 250mm)
流动相:乙腈:水=65:35(V:V)
流速:1.0ml/min
柱温:30℃
检测池温度:40℃
进样量:20ul
标准品色谱图:
样品色谱图:
方法二
样品溶液制备
标准品溶液制备:分别精密称取果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖各0.1g于100ml容量瓶中,加适量水使之充分溶解并定容至刻度,摇匀,备用。
样品溶液制备:精密称取0.5g样品于100ml容量瓶中,加适量水使之完全溶解并定容至刻度,摇匀,0.45um水相微膜过滤后,待测。
色谱条件
检测器:示差折光检测器
色谱柱:糖柱(树脂填料,8um,10 X 300mm)
流动相:纯水
流速:1.0ml/min
柱温:60℃
检测池温度:40℃
进样量:20ul
标准品色谱图:
样品色谱图:
两种方法不同,检测效果相差很大,下面就一一解读。
首先说实验费用:氨基柱便宜于糖柱,一般不到糖柱40%价格,而流动相方法一中乙腈+水要远远贵于方法二中的纯水。另外氨基柱的使用条件没有糖柱那么苛刻,使用寿命也比糖柱长。整体来说采用方法一实验费用更低(一般情况下)。
结果准确性:氨基柱分离度好,实验结果更准确,并且可以通过调整流速、流动相中两相比例、柱温等来控制检测时间及分离度等指标。糖柱分离度及分析时间只和流速关系较大,因此分离度如果不理想,调整色谱条件单一,效果一般相对不理想,检测结果相对不准确。
检测时间:氨基柱分离速度慢,检测时间长,糖柱却要快一些。
灵敏度:采用糖柱检测灵敏度要高一些,尤其是果糖、葡萄糖等。糖柱还有一个优点那就是相同浓度的样品色谱峰高、峰面积也较接近。
实验繁琐程度:使用糖柱时流速、柱温等条件一般要缓慢变化,不允许突变,色谱柱耐压也不高,一般就5MPa左右。使用氨基柱没这么繁琐,耐压一般也能达到20MPa。
总之采用以上两种方法都可用于检测蜂蜜及其它食品、保健品等中的糖类物质,但优缺点不同,检测效果相差很大。我们实验时要根据实验需要选择合适的方法,力争花最小的代价实现效益最大化。