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中药牛蒡子抗病毒有效部位提取及筛选

mayoutui

2014/12/31

前处理综合讨论

中药牛蒡子抗病毒有效部位提取及筛选

牛蒡子（因为牛的力量大，故而古代医家又称其为大力子），为菊科二年生草本植物牛蒡（学名：Arctium lappa L.）的干燥成熟果实。生用或炒用，用时捣碎。具有疏散风热，宣肺透疹，利咽散结，解毒消肿之功效。属于解表药中发散风热药。疏散风热；用于风热感冒、温病初起；风热或肺热咳嗽、咯痰不畅；咽喉肿痛；斑疹不透；麻疹初期，疹出不畅及风疹瘙痒；疮疡肿毒及痄腮等。生用可润肠通便，热毒咽喉红肿疼痛，兼有热结便秘尤宜；用于热毒疮肿尚未溃者，常与地丁，野菊花等清热解毒药配伍.

了确定牛蒡子抗病毒的活性部位，将牛蒡子分别经D101大孔树脂、溶剂萃取（D101大孔树脂水洗部分使用溶剂萃取），分别得到水洗部分、20%醇洗部分、80%醇洗部分、氯仿层、正丁醇层、水层并分别进行体外抗病毒活性测试(抗病毒活性部位的提取分离见下图：)。

实验材料

供试样品的制备：将氯仿层(CHCl3 Extract,CE)用50ml甲醇溶解,水层(Water Exrtaet,WE)浓缩为50ml，水洗部分(Water EuftionFraction,WEF)、20%醇洗部分(20%Ethanol ElutionFraction,20%EEF)、80%醇洗部分(80% Ethnaol EultionFraction 80%EEF)、正丁醇层(n-Butanol Extract,BE)分别用水:甘油=10:1(v:v)溶剂溶解。以上各部位进行活性部位筛选。

实验方法

选择对腺病毒、流感病毒敏感的细胞，即HEF细胞(人胚肺纤维细胞)、FL细胞(人单膜细胞)。对HEF细胞敏感的腺病毒采用HEF，对FL细胞敏感的流感病毒采用FL。两种细胞按常规方法传代，用时制成2×105/ml细胞悬液。每孔0.1ml,24小时形成单层后备用。

病毒的毒力测定采用TCID50微量法,不同病毒按100~150 TCID50/0.1ml。

抗病毒粗筛实验方法

形成单层的细胞孔弃取培养液,加入以上各个样品培养24小时,吸出牛蒡子液再加入病毒液,按一般病毒吸附时间,均采用置37℃吸附一小时，5%CO2恒温箱培养48-96小时,待病毒对照孔病变达+++﹏++++(细胞表现为圆化、聚堆或破裂及脱落)，细胞对照正常(即单层表面可有少量圆化细胞，但不出现聚堆、破裂和脱落)时，测其结果。利用抗病毒实验结果，选择出牛蒡子各部位中对上述两种病毒抑制作用最强的部位，确立牛蒡子抗病毒的有效部位。

实验结果

利用倒置显微镜观察(CPE) 牛蒡子各部位对腺病毒-Ⅲ型(ADV-Ⅲ)和流感甲-Ⅲ型(A-Ⅲ)病毒的作用。结果表明：80%醇洗部分(80%EEF)、正丁醇层(BE)对上述两种病毒作用最强。（见下表：）

结果与讨论：

1、近年来，具有抗病毒活性的中药受到人们的广泛重视，牛蒡子做为一种传统的疏散风热药,以其优异的抗病毒效果而广泛用于临床,本试验对牛蒡子抗病毒有效部位的化学成分进行了研究，为牛蒡子开发新药奠定了基础并提供了科学依据。

2、通过体外实验表明，牛蒡子提取物中经D101大孔树脂用80%醇洗脱部分和水洗部分的正丁醇萃取层为抗病毒主要有效部位。其含量测定方法有待进一步研究。

分
该帖子已被版主-999youran加10积分，加2经验;加分理由:原创

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sixingxing

第1楼2014/12/31

中药做起来很不容易啊

0

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