wy20071722
第4楼2015/01/14
1.虽然你说的有道理，我们有试过不加封堵剂做出来marker的相对位置是没有差别的，不知道您有没有试过？也因此有此疑问。
2.加尿素的功能是什么？
3.聚焦的时间优化成什么样叫做好？怎么确定封堵剂的量是合适的？
4. 既然是电压迁移，那么和聚焦过程的差别在哪里呢？
wy20071722
第5楼2015/01/14
ITP的过程达到稳定以后每个区段的焦耳热、pH值都是有差别的，如果把这样的区段无限细分，不就是pH梯度吗？等电聚焦的时候两性电解质充满管，阳极端和阴极端分别是磷酸和NaOH溶液，不是类似于前导电解质、尾随电解质吗？要是这样的话，也就是说，在电场的推动下，这种状态是可以保持稳定的；一种由有限个pH值依次排列形成的pH区段是可以实现的；过度聚焦是可以在继续维持电压的情况下避免的……
nini2006
第8楼2015/01/15
没用CE分离过蛋白质，对以下说法不敢打包票100%正确：2、 我用别的方法分离分析蛋白质时，尿素的加入是为了使蛋白质变性成一维结构，释放出结构信息。4、一步法中，聚焦和迁移是同时进行，没区别。两步法中，聚焦时的电解液和迁移时的电解液是不同的，另外电压和时间也有不同，一般情况下前者电压较低时间较短。
wy20071722
第10楼2015/01/15
这里会提出这个问题的最关键的一点就是：在H+参与平衡的ITP中，它们的pH是有差别的，只是这种差别是几个梯度而已。而形成多少个梯度，实际上与样品是密切相关的，少数的样品组成形成少数的梯度，多数的样品组成形成多数的梯度，就跟微分一样，把这个梯度无限细分下去，就是连续的pH梯度。两性电解质是许多含有不同等电点的多肽的混合物。而我们所测定的样品与两性电解质混合在一起，行为应与两性电解质差不多，只是我们要观察它，它才是样品，要是不是观察它，它和两性电解质的区分就不大了（当然，紫外吸收还是有差别的）。
那么，在等电聚焦的过程中，pH梯度形成的原本的解释是什么呢？在陈义的书中有说明。晕，现在那本书找不到了，这里就不能引用出来了。大概意思是由于磷酸和NaOH的存在，形成pH梯度，而两性电解质移动到各自等电点的位置，样品移动到等电点的位置，移动推出。这里的问题来了，pH梯度是先于两性电解质移动形成，还是同时或是在两性电解质移动之后呢？要是先于两性电解质移动形成，那么两性电解质的作用为何？在这种情况下，就是说去掉两性电解质的存在，这个pH梯度已经形成了？维持电压，这个pH梯度还能维持吗？没有了两性电解质，单是有样品，还能做聚焦吗（还能对样品进行聚焦）？我们可以确定的是，当停止聚焦的时候，两性电解质停止移动，pH梯度形成。这里我倾向于认为pH梯度的形成与两性电解质的移动关系是“边移动，边形成”，它们是同一事件的不同角度的特征。而形成这个pH梯度的过程就是类似与ITP的稳态形成过程。这里的两性电解质必不可少，它的作用就好像是ITP中的样品，无限多的样品组成形成了连续的pH梯度，导致等电聚焦的发生（混在其中的样品也是一种两性电解质的存在）。在这里面，形成的ITP的区带无限小，看起来就好像一个点，样品被聚焦。
这个过程我也没有真正实验过，只是当初看到的时候这么想了，我什么都不会，只会胡思乱想，诶！不知道大家是否觉得这么想是否有道理。
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