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液相基线问题

液相色谱(LC)

  • 各位大大,你们好。请教一下,前三分钟220nm下总是出现波浪线(254nm正常,无波浪线和漂移),后面基线向下漂移,是何缘故?压力流速都正常,流动相A:水(0.1%TFA)B:乙腈(0.1%TFA),都经过超声除气泡了。梯度如下:
    Time (min) A B
    0.5 95 5
    7.0 5 95
    7.1 2 98
    9.1 2 98
    9.2 95 5
    11 stop
    仪器是Agilent 1100的。谢谢各位!

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  • sepuyiqicaozuo

    第1楼2015/06/03

    水换成屈臣氏的水试下。

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  • 夏天的雪

    第2楼2015/06/03

    应助达人

    波浪线可能是TFA影响的,基线有漂移应该是梯度导致,您这95-5%的变化幅度有点大

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  • 浪淘沙隐

    第3楼2015/06/04

    梯度太急了,1100作为普通的HPLC根本不能承受这样的梯度,UPLC才能用这样的梯度。另外,TFA截止波长是230左右,220nm下肯定基线很难看。

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  • wjyyh1983

    第4楼2015/06/04

    现在用的就是屈臣氏的水

    sepuyiqicaozuo(sepuyiqicaozuo) 发表:水换成屈臣氏的水试下。

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  • wjyyh1983

    第5楼2015/06/04

    AB相的TFA浓度一样,应该从头到尾,TFA浓度不会改变的。忘记说了,基线是从4分钟开始往下移的,除非是220nm下水的吸收比乙腈吸收要大。

    夏天的雪(bingwang228) 发表:波浪线可能是TFA影响的,基线有漂移应该是梯度导致,您这95-5%的变化幅度有点大

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  • wjyyh1983

    第6楼2015/06/04

    我们总共4套agilent 1100都在用同样的方法,只有这一套有这样的问题。

    浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:梯度太急了,1100作为普通的HPLC根本不能承受这样的梯度,UPLC才能用这样的梯度。另外,TFA截止波长是230左右,220nm下肯定基线很难看。

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  • 浪淘沙隐

    第7楼2015/06/04

    那真很神奇,1100能在2分钟内恢复初始状态,理论上1.0流速需要至少5分钟。

    wjyyh1983(wjyyh1983) 发表: 我们总共4套agilent 1100都在用同样的方法,只有这一套有这样的问题。

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  • 浪淘沙隐

    第8楼2015/06/04

    基线漂移是正常的,应该是水质不稳定的原因,我这就是这样,有时候基线向上漂移,有时向下漂移。

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