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流动相的行踪有多少隐患在其中

一片枫叶

2015/07/16

液相色谱（LC）

流动相的居房

流动相一个娇气的纯洁流体，它是有超声脱气的水和纯净的溶剂（甲醇或乙腈）组成，有着流水一般温柔多变的身段，心地纯洁而且自重，宽容能力强，但不善于改变容纳对象。不过也有自己的小错点，娇嫩的身段也经常受到空气的侵蚀，有时受到细菌的感染，为了保持稳重不变的心和洁净的身段，平时要经过严格的脱气和超声训练。
自己有时待在小房子里也会犯些小毛病，在自然条件尤其是适宜的光照条件下，总是耐不住寂寞，就会和身边的小伙伴手拉手搞起小团体，小团体还会慢慢壮大，直到能被人发现，房子里会出现一些絮状物沉淀，为了防止此类现象的出现，避免阳光直射，居住的小房子要求居然是茶色玻璃的，

居住条件虽然那么优越，不过磷酸盐小伙伴来了，就容易发生感染，细菌就像如虎添翼，更加肆无忌惮。这时自己的小房间就会受污染，若不做处理就会严重影响自己。
有的小朋友做的就比较好，为了防止它的感染，禁止灰尘进入小房间，创造了种种发明，他们在房顶钻几个小孔，进气的小孔用滤头堵封，既能进气又能防尘，效果妙极了。有的用了安全帽，也有同样的效果。

流动相对自己的要求也很严格，超声脱气当然是必选，微膜过滤也要经过这一关，脱掉有害的气体，滤掉有害的颗粒，最后还要通过滤头的检验——滤头的孔径是0.45um，材质分为玻璃烧结石英和不锈钢的，如果这个东西脏了的话，就会造成吸液不畅，不过可以进行清洗，玻璃材质的通常是用稀硝酸侵泡过夜，不锈钢材质的可以直接超声清洗。

脱气机中的流动相

通过滤头检验的流动相自然是经过预先脱气的，这样能大幅度减少脱气机的工作负担，因为脱气机的脱气效率是一定的，如果自身溶解的气体超过了脱气机能处理的最大值(尤其是在高流速的情况下)，气体就除不干净了，那时候就可能在混合的时候，形成气泡影响仪器压力出现波动和噪音了。
流动相耐动不耐静，如果长时间呆在在脱气机里，携带的微生物，细菌藻类很可能继续繁殖，脱气机管道里就布满了水藻而堵住，亦或乙腈还会聚合，因此，长时间不用的脱气机一定把水相替换成甲醇，防止长藻和乙腈聚合。
堵和漏是一对欢喜冤家，液相色谱上能堵的地方，也都有可能漏，脱气机也不例外，通常漏液有两种可能，一种是接头松动，只要重新拧紧即可，另外一种情况就比较倒霉了，真空腔损坏，这个就要大修了，造成这种灾难的通常都是，流动相的速度超过了脱气机能耐受的最大流速造成的。
流动相从脱气机出来就到了高压泵，

很多情况下，泵的问题反映在压力上，压力波动就是最常见的一类问题，泵正常的压力波动通常会在2%以内，切平稳规律，不正常的波动通常由于气泡和盐造成：如果流动相中的气泡没有被脱气机除掉而到了泵以后，那么就会造成压力波动，通常我们可以通过重新purge流路和再次脱气流动相解决。由盐造成的波动主要是因为流动相中加入了浓度较高的缓冲盐，在含盐流动相与有机相混合的时候，盐会有微小的析出，从而导致压力异常波动，解决这类问题可以考虑适当的降低盐浓度，或者使用甲醇取代乙腈有机相。如果由于种种原因一定要用到这种流动相，可以考虑在有机相中加入一定比例的水，然后适当提高梯度结束的终点。
在泵的维护里还有一个经常会做的工作就是更换purge阀上的过滤白头，其实难点不在更换这个白头本身上，而是在于判断什么时候该换，通常判断的标准是纯水5mL/min流速purge的时候，如果压力超过10bar，要考虑更换。更换下来的白头，也可以大概判断仪器的使用状况：如果白头是白色的，好像不脏，但就是堵，那有可能是流动相中的盐有析出造成的；这台仪器长期忍受着高盐流动相，如果换下来的是灰黑色的，这是最常见的状况，这是由于泵头密封垫的磨损造成的；如果出现频繁更换白头切更换下来的都是灰黑色的话，提示仪器密封垫的磨损过快，可能要考虑升级柱塞杆清洗的设备；如果这个白头换下来的颜色是黄色，绿色等怪异的颜色，那么，仪器该讲讲卫生了，这是流动相里的微生物造成的。
在泵的使用过程中，有时会遇到替换流动相的情况，这种替换是指从反相溶剂替换到正相溶剂或者反过来替换的过程，这个过程最重要的就是流动相的兼容性，常用的正反相色谱溶剂是不互溶的，所以在替换中间，一定要用异丙醇彻底冲洗系统，保证管路里所有的原有溶剂都被异丙醇替换掉。

流动相继续往前走，就到了进样器，进样器分手动和自动两大类。

自动进样器最常见的问题就是脏，用专业说法叫交叉污染，交叉污染产生的原因很直接，样品残留在进样针内/外表面，并随在下一次进样进入色谱系统，要解决交叉污染，也很简单，就是洗，自动进样器都会有洗针的功能，如果样品浓度较高或者是吸附性比较强的样品，一定要打开此功能，由于仪器设计的原理，安捷伦的自动进样器无需清洗进样针内壁；手动进样器的话，要注意手动清洗针的内外表面。如果忘记打开洗针功能，污染可能已经残留在了针座或六通阀阀上，这个时候要最这两个部件清洗，需要按照仪器说明书上的维护步骤拆下这两个部件进行超声清洗。
出现在自动进样器上的另外一个问题是峰面积重现性问题。通常这是因为自动进样器吸样品的时候出现了问题，首先观察样品的液面是不是足够高，以保证进样器可以吸到；如果排除了这个问题，就要看看自动进样器的设置了，对于一些粘度大的样品，要降低自动进样器的吸取速度，这个可以在仪器设置中改变；当然，还有一些更罕见的问题：样品吸附在了样品瓶上，这个时候可以考虑换一中材质的样品瓶；还有一类情况，是由于样品瓶的瓶盖拧的太紧，导致瓶内与空气隔绝，使得吸样不准确，这个时候可以考虑适当的把瓶盖拧松一点。
流动相一路波折，进入柱温箱，

柱温箱会有两个控温区，左边的区域上写着3uL，右边写着6uL，表示这两个温区内的体积不一样，通常，我们要使用3uL的那个，以减小仪器的延迟和扩散。
流动相过五关斩六将，下一站就是检测器。

检测器里有个非常重要的部件是光源，俗称灯，灯是一个消耗品，就像家里的灯泡一样，用到一定程度就坏了。但是检测器里的灯不能家里的电灯泡一样点不亮了再换，因为放在检测器里的灯是对发射能量有要求的，一旦能量衰减到一定程度，就会出现基线噪音变大，灵敏度降低等一系列影响使用的问题。通常，灯的寿命是2000h，当到达这个时限的时候，我们就要特别关注灯的能量状况，可以通过仪器维护软件中自带的“灯能量测试”来判断，测试的结果会分别评估低中高三个波长段的能量，一旦某个波长段的结果显示失败，就表示要换灯了，通常首先出现失败的都是低波长段。

检测器里另外的一个重要部件是检测池，也叫流通池。很多时候，大家最关心的一个问题是检测池被堵掉，因为检测池通常不是很耐压，所以一旦堵掉，很可能造成损坏。不过还好，检测池通常不太容易被堵，原因是几乎所有的颗粒杂质都会被色谱柱拦下了，所以堵塞检测器的东西基本都不是来自样品的，很可能是后来“产生”的，比如含盐的流动相残留在了检测池里导致盐析出，或者是乙腈聚合在检测池里，要不就是有些童鞋不太小心，不小心压住了废液管线。
关于检测池，有时候还会遇到一个小问题，就是检测池里的气泡，气泡是哪儿来的，可能是流动相中溶解的气体，也可能是仪器长时间不使用检测池干了导致的，体现在仪器的表现上，就是基线噪音某明其妙的变大，出现毛刺等等，这个时候，可以先观察系统压力；如果压力平稳正常，可以判断这个波动应该不是由于泵造成的，那肯定就是由于检测池里的气泡造成的了，对付这个气泡，没有太好的办法，只能用纯甲醇慢慢冲，不过倒是有个小办法可以防止，就是在检测器的出口出用一小段细内径的PEEK管使其产生一点背压，可以很大程度的预防气泡的产生，但是注意千万不要太长。

流动相一路行程，最后进入废液瓶，完成了自己的承载任务，也将寿终正寝，了却一生。

精
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相关话题

又又1990

第1楼2015/07/16

流动相的行踪解析呀

0

一片枫叶

第2楼2015/07/17

应助达人

体现流动相的特点，性质，使用中存在的一般问题：
流动相具有稳定性。
流动相不与样品发生反应。
流动相容易与空气中的氧发生反应而变质。
流动相容易被细菌感染。
含有缓冲盐的流动相性质更容易发生变化。
乙腈流动相容易聚合成小团体。
使用注意事项及存在的问题：
使用前必须超声脱气，过滤——气泡及污染物使系统压力波动。
含缓冲盐的流动相盐容易析出堵塞污染管路及系统——造成压力波动。
含缓冲盐的流动相长时间在脱气机中会对脱气机造成污染，影响脱气机正常工作。
对高压泵过滤白头污染的判断及处理措施。
样品对进样器的交叉污染。
检测器能量的判断。
流动相气泡及缓冲盐对检测器的影响及处理措施。
又又1990(v2984502) 发表:流动相的行踪解析呀

0

老多_小多

第3楼2015/07/17

一个流动相走过了所有历程，也见证了仪器的奇妙构造

0

longqiqi66

第4楼2015/07/17

基本会出现的问题都提到了！比较专业的解读！受益匪浅！

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dooby

第5楼2015/07/20

感谢分享好东西

0

夏天的雪

第6楼2015/07/20

应助达人

流动相贯穿仪器的始末，就如同身体中的血液，保障仪器的健康运行

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一片枫叶

第7楼2015/07/21

应助达人

正确选择使用流动相是关键，正确维护保养仪器是重点。
夏天的雪(bingwang228)发表:流动相贯穿仪器的始末，就如同身体中的血液，保障仪器的健康运行

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dooby

第8楼2015/07/27

感谢分享好资料

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一片枫叶

第9楼2015/07/27

应助达人

相互学习，感谢您的支持！
dooby(dooby)发表:感谢分享好资料

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秋醉虞阳

第10楼2015/08/04

人生如流动相

0

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