肝脏组织中多种药物的固相萃取方法

空空的天空

2015/08/16

私聊

兽药/抗生素检测

在动物性食品中，需要检测的不仅有农药残留污染物，还有兽药以及其他添加物。而动物性食品的主要基质干扰来自于蛋白质、多肽、氨基酸和脂肪等。样品萃取净化的主要困难来自于极性药物与强水溶性基质(蛋白质、氨基酸)的分离和弱极性药物与亲脂性基质的分离。由于兽药的化学性质差异很大，使多残留同时检测具有非常大的难度。
样品预处理：肝脏组织1 g与3 mL水混合匀浆，取0．4 mL(等于100 mg肝脏组织)中加入1 mL去离子水，并在超声波水浴中振荡5 min后6000 g离心10 min。上清液A供萃取酸性及中性药物。样品离心后得到的沉淀物中加入枯草杆菌蛋白酶的Tris溶液，混合均匀后(pH 10．5)，60℃水解1 h。水解完成后，将样品冷却至室温，用10％(体积分数)磷酸将样品的pH调节至6～7，并在6000 g离心10 min。所得到的上清液(B)用于萃取碱性药物。
固相萃取柱：Bond E1ut Certify非极性／阳离子交换混合柱，130mg／3 mL，Varian公司。
柱预处理：2 mL甲醇，2 mL磷酸缓冲溶液。
样品过柱：0．4 mL上清液A过柱。
柱洗涤：1 mL水，0.5 mI，磷酸缓冲溶液(pH 4．0)。
柱干燥：50μL甲醇，空气。
目标物洗脱：4 mL丙酮／氯仿(1：1，体积比)，洗脱酸陛和中性药物(馏分A)。
柱预处理：2 mL磷酸缓冲溶液(使用上述同一根萃取柱)。
样品过柱：上述上清液B过柱。
柱洗涤：1 mL 1 mol／L醋酸(pH 2．4)，2 mL丙酮／氯仿(1：1，体积比。
柱干燥：50μL甲醇，空气。
目标物洗脱：2 mL 2％(体积分数)氨化乙酸乙酯，洗脱碱性药物(馏分B)。
浓缩／分析：分别将丙酮／氯仿洗脱馏分及氨化乙酸乙酯洗脱馏分在氮气氛40℃浓缩至约100μL，然后进行GC分析。

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