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某降压药的手性分离—我的拖尾，我做主

yangdeying

2015/08/24

化学药检测

某降压药的手性分离—我的拖尾，我做主

1.前言
近年来，由于受到遗传、环境、生活水平等诸多因素的影响，高血压的发病率日趋升高，成为中老年人群的常见疾病。这种现象也就催生了大量降压药的问世，盐酸马尼地平就是其中一种。

盐酸马尼地平是新型的二氢吡啶(DHP)类钙拮抗剂，存在1个光学活性中心，临床上以消旋体的形式存在，且两种对映体生理活性差异较大，S型是R型生理活性的30-80倍。因此，建立一种拆分对映体的方法，对提高药效和安全用药意义重大。

作为一次方法开发，就从拿到结构式开始。共轭结构、羰基等结构，显示紫外有吸收，可以选择紫外检测器；易溶于乙醇；含有仲胺、叔胺结构；二氢吡啶4位为手性中心。为了更高效的实验，减少盲目性，查阅文献也是必经之路。准备结束，选一款与文献性能接近的色谱柱，就开始实验了。
2.实验部分
2.1实验用品
Agilent1100紫外检测器；
正己烷、异丙醇均为色谱纯；
三乙胺为分析纯；
盐酸马尼地平、S-盐酸马尼地平对照品、R-盐酸马尼地平对照品；
2.2初始色谱条件
色谱柱：Venusil^®CA手性柱（5 μm，1000 Å；4.6 × 250 mm）；
流动相：正己烷︰异丙醇=90︰10；
流速：1.0 mL/min；
波长：236 nm；
柱温：25℃；
进样量：10 μL。
2.3样品制备
R-盐酸马尼地平对照溶液：称取R-盐酸马尼地平样品适量，精密称定，以无水乙醇超声溶解，并稀释制成1.0 mg/mL的对照溶液；
S-盐酸马尼地平对照溶液：称取S-盐酸马尼地平样品适量，精密称定，以无水乙醇超声溶解，并稀释制成1.0 mg/mL的对照溶液；
盐酸马尼地平供试品溶液：称取盐酸马尼地平样品适量，精密称定，以无水乙醇超声溶解，并稀释制成1.0 mg/mL的供试品溶液；
2.4实验过程

参照查阅文献，开始实验。结果发现，色谱峰拖尾，R型和S型重叠后有交叉，无法实现完全分离，有图有真相。

图1.S-盐酸马尼地平对照品溶液高效液相色谱图

图2.R-盐酸马尼地平对照品溶液高效液相色谱图

色谱峰拖尾，首先考虑到溶剂效应，更换了接近流动相的溶剂，并没有改善；

图3. 更换溶剂后S-盐酸马尼地平对照品溶液高效液相色谱图
其次考虑到进样量是否过大，减少进样量后，仍是严重拖尾。接下来，考虑到结构中含碱性基团，于是更换流动相，加入0.05%的三乙胺。屡试不爽的扫尾剂依然奏效了。

图4. R-盐酸马尼地平供试品溶液优化后高效液相色谱图

图5.S-盐酸马尼地平供试品溶液优化后高效液相色谱图

最后样品的分离自然不会差。

图6. 盐酸马尼地平供试品溶液优化后高效液相色谱图

图7.盐酸马尼地平供试品溶液优化后测试结果
2.5优化色谱条件
色谱柱：Venusil^®CA手性柱（5 μm，1000 Å；4.6 × 250 mm）；
流动相：正己烷︰异丙醇︰三乙胺=90︰10︰0.05；
流速：1.0 mL/min；
波长：236 nm；
柱温：25℃；
进样量：10 μL。
3.实验心得
这次实验虽然对于很多色谱前辈来说再简单不过，也许不需要如此多的尝试就一步到位找到问题根基。但是对于我一个色谱新手来说，从查阅文献到成功分离，目标一点一点清晰，虽然只是解决了拖尾问题，还是真切的体会到色谱的魅力，所以很高兴跟大家交流分享，也希望以后能解决更加“高大上”的问题。
陈述中可能有很多不到位甚至错误的地方，希望大家多多指点，我也会积极改正哒！

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分
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土老冒豆豆

第1楼2015/08/24

应助达人

据说手性柱子很贵，而且对保存条件也苛刻。不晓得是不是这样。

0

浪淘沙隐

第2楼2015/08/24

手性分离原则之一就是碱性物质流动相中加碱，但是一般加二乙胺，加三乙胺的少；酸性物质流动相中加酸，一般是三氟乙酸；中性物质无所谓。

1

yangdeying

第3楼2015/08/24

谢谢，长知识了。后来查资料，我确实也看到正相多用二乙胺，反相多用三乙胺，有什么理论依据吗？影响很大吗？谢谢指教！
浪淘沙隐(zhoujin83) 发表:手性分离原则之一就是碱性物质流动相中加碱，但是一般加二乙胺，加三乙胺的少；酸性物质流动相中加酸，一般是三氟乙酸；中性物质无所谓。

0

上党之巅

第4楼2015/08/24

应助达人

不错的经验分享

1

yangdeying

第5楼2015/08/24

手性柱相对其他同规格的普通反相色谱柱，确实要贵不少。至于保存条件，我目前用到的都是正相手性柱，通常保存在正己烷：异丙醇=9:1条件下就可以。不过长时间不用，要注意定期冲洗，防止因溶剂挥发、填料变干导致色谱柱性能下降。
土老冒豆豆(土老冒豆豆) 发表:据说手性柱子很贵，而且对保存条件也苛刻。不晓得是不是这样。

0

青林

第6楼2015/08/24

三乙胺作为扫尾剂的确是很有用

0

longqiqi66

第7楼2015/08/24

不错的分享！学到了不少！

0

浪淘沙隐

第8楼2015/08/25

我也不清楚为什么，可能是担心三乙胺碱性太强会伤柱子。
yangdeying(v3033461) 发表: 谢谢，长知识了。后来查资料，我确实也看到正相多用二乙胺，反相多用三乙胺，有什么理论依据吗？影响很大吗？谢谢指教！

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云雀

第9楼2015/08/28

很好的经验分享~~有借鉴意义

0

吕梁山

第10楼2015/08/30

我看见分离度还是不错如果可以进行定量就好了

0

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