保留时间发生漂移或快速变化原因? 关于漂移问题: ① 温度控制不好,解决方法是采用恒温装置, 保持柱温恒定; ② 流动相发生变化,解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等 ; ③ 柱子未平衡好,需对柱子进行更长时间的平衡。 关于快速变化问题 ① 流速发生变化,解决办法是重新设定流速,使之保持稳定; ② 泵中有气泡,可通过排气等操作将气泡赶出; ③ 流动相不合适,解决办法为改换流动相或使流动相在控制室内进行适当混合。 出现拖尾或双峰的原因?
① 筛板堵塞或柱失效,解决办法是反向冲洗柱子,替换筛板或更换柱子; ② 存在干扰峰,解决办法为使用较长的柱子;改换流动相或更换选择性好的柱子 ; ③ 可能柱超载,减少进样量。 HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法 ① 样品量不足,解决办法为增加样品量; ② 样品未从柱子中流出。可根据样品的化学性质改变流动相或柱子; ③ 样品与检测器不匹配。根据样品化学性质调整波长或改换检测器 ; ④ 检测器衰减太多。调整衰减即可; ⑤ 检测器时间常数太大。解决办法为降低时间参数; ⑥ 检测器池窗污染。解决办法为清洗池窗; ⑦ 检测池中有气泡。解决办法为排气; ⑧ 记录仪测压范围不当。调整电压范围即可; ⑨ 流动相流量不合适。调整流速即可; ⑩ 检测器与记录仪超出校正曲线。解决办法为检查记录仪与检测器,重作校正曲线。 做HPLC分析时,柱压不稳定,原因何在?如何解决? ① 泵内有空气,解决的办法是清除泵内空气,对溶剂进行脱气处理; ② 比例阀失效,更换比例阀即可; ③ 泵密封垫损坏,更换密封垫即可; ④ 溶剂中的气泡,解决的办法是对溶剂脱气,必要时改变脱气方法; ⑤ 系统检漏,找出漏点,密封即可; ⑥ 梯度洗脱,这时压力波动是正常的。 更换了另一种牌号ODS柱,但保留时间不能重现,为什么? 这是因为被分析物可能具有形成氢键的能力。尽管过去几年来,填料的制造技术有了极大的提高,但不同的厂商的ODS填料表面硅醇基的浓度不同。正是这些硅醇基可能与样品发生相互作用。因此,同一 被分析物中的各组分在不同牌号的ODS柱上的相对保留时间就可能不同。在流动相中加入少量竞争物, 如三乙基胺(TEA),将会使硅醇基的成键能力饱和,从而能保证不同牌号柱子上的相对保留时间具有较好的重现性。如分离情况可以,系统稳定,达到系统适用性要求,就不必保留时间的重现。 HPLC柱验收测试时柱压过高为什么? 柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。 ① 拆去保护预柱,看柱压是否还高,否则是保 护柱的问题,若柱压仍高,再检查; ② 把色谱柱从仪器上取下,看压力是否下降, 否则是管路堵塞,需清洗,若压力下降,再检查; ③ 将柱子的进出口反过来接在仪器上,用10倍柱体积的流动相冲洗柱子,(此时不要连接检测器,以防固体颗粒进入流动池)。这时,如果柱压仍不下 降,再检查;只用于使用过的柱子。 ④ 更换柱子入口筛板,若柱压下降,说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质,正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。若柱压还高,请与厂商联系。一般情况下,在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题,SGE提供的Rheodyne 7315型,过滤器就是解决这一问题的最佳选择。