【11月份原创】月旭C8色谱柱测定激素类药

氢锂钠钾铷铯钫

2015/10/31

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月旭色谱柱测定激素类药
色谱柱信息：ln:6901.03;sn:691501522;pn:89222-31043;Ultimate®F-C8，4.6mm×250mm，5μm

本品主要成分为地奈德，其结构式如下：

制剂为地奈德乳膏，适应症：适用于对皮质类固醇治疗有效的各种皮肤病，如接触性皮炎、神经性皮炎、脂溢性皮炎、湿疹、银屑病、扁平苔藓、单纯性苔藓、汗疱症等引起的皮肤炎症和皮肤瘙痒的治疗。
主要参考USP38，初步拟定质量标准：
有关物质取本品适量（约相当于地奈德35mg），精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇约35ml，在60℃水浴中加热5分钟，充分振摇使地奈德溶解，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，置冰浴中冷却1小时，取出，迅速滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；精密量取1ml，置20ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为灵敏度溶液。照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部通则0512）试验，含量测定项下的色谱条件，用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Ultimate®F-C8，4.6mm×250mm，5μm或效能相当的色谱柱）；以0.1%磷酸水溶液为流动相A，乙腈为流动相B，按下表1进行线性梯度洗脱；检测波长254nm。取灵敏度溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%。再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，扣除溶剂峰与辅料峰外，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的2倍（0.2%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（1.0%），已知杂质与对照溶液主峰面积比较，限度见下表2.

表1.流动相线性梯度洗脱

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
0	70	30
8	68	32
10	68	32
18	65	35
26	30	70
35	30	70
40	70	30
50	70	30

表2.已知杂质限度

16α-羟基泼尼松龙（Cp90304）	不得过0.15%
泼尼松龙（Cp90110）	不得过0.15%
地奈德1,2-去氢（Cp90898）	不得过0.50%
泼尼松龙21-羟基δ-16（Cp90647）	不得过0.50%
Cp90898+Cp90647	不得过0.50%
地奈德环氧类似物（Cp90136）	不得过0.50%
地奈德1,2-二氢类似物（Cp90243）	不得过0.50%
Cp90136+Cp90243	不得过0.50%
地奈德9-溴（Cp90176）	不得过0.15%
地奈德21-乙酸酯（Cp90316）	不得过0.15%

典型色谱图：
1.系统适用性试验图谱：

保留时间与目标物名称：

序号	目标物	保留时间（min）
1	16α-羟基泼尼松龙（Cp90304）	5.113
2	泼尼松龙（Cp90110）	6.841
3	地奈德1,2-去氢（Cp90898）	9.489
4	泼尼松龙21-羟基δ-16（Cp90647）	10.308
5	地奈德	12.055
6	地奈德环氧类似物（Cp90136）	12.479
7	地奈德1,2-二氢类似物（Cp90243）	13.792
8	地奈德9-溴（Cp90176）	16.127
9	地奈德21-乙酸酯（Cp90316）	26.609

2.供试品溶液典型色谱图：

3.对照溶液典型色谱图：

4.空白溶剂典型色谱图：

简要试验结果与分析：
本试验的难点就是地奈德主峰后的物质（地奈德环氧类似物（Cp90136））的分离度，用其他品牌的色谱柱无法得到有效分离，而其他品牌又无法提供试用机会，真是一筹莫展时，看到月旭公司能提供试用并提供相关的色谱图（看到提供的分离物质的结构式我大致有谱了，因为激素类的药一般都有一个同样的母核）和免费试用（送货时间很快），一下就有了信心，在此感谢月旭公司及teacher chen，真是雪中送炭。目前的通过调整柱温，可以让其分离度达到1.6. 图谱就没有上传了，但是在后续辅料选择时，采用该柱温辅料峰不能和目标峰有效分离，折中还是选择分离度为1.2为佳，即柱温35℃，调整流动相收效不佳。

附件：

溶剂空白2.pdf
样品-1%.pdf
样品-100%.pdf
系统适用性试验.pdf

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