梯度洗脱（二）梯度的变化

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2015/12/13

私聊

液质联用（LCMS）

1 .梯度洗脱等于无限个等度洗脱

figure 1a所示，条件是60%B的等度洗脱，我们会发现，在色谱的前端，峰并没有很好地分离，而在色谱的尾端，虽然峰分离的很好，但峰变的很宽。
如果降低B的比例，前面的峰的可以得到分离，而后端的峰宽将会变的更宽；如果提高B的比例，后端的峰可以快速流出，峰宽也会窄一些，但前端的峰会更加难以分离，所以，遇到这种情况，很难用等度洗脱得到很好的分离。
为什么会出现这种情况？通过计算，发现1a中样品的保留因子范围是0.9(34/0.9 ≈ 38),样品的极性差别很大，而通常等度洗脱的保留因子范围是1
figure 1b,梯度洗脱的条件是 50-100% in 5 min，会发现不论是前端还是后端，峰都得到了很好的分离，并且峰宽几乎是一样的
Figure 1c做了一个试验，将figure 1中分析的15种物质分成了5组，每组都是等度洗脱，B的比例分别是49%，61%，72%，80%和88%，每组的保留因子大概都是k等于3，峰宽也几乎一样，是不是和figure 1b很相似？如果将c中的等度洗脱的条件叠加，就是一个梯度洗脱，也就是说梯度洗脱可以理解为是有无数个比例变化很小的等度洗脱的叠加。
2.梯度洗脱的窄峰宽和等峰宽
梯度洗脱的最大好处就是能够窄的峰宽，并且同一梯度内的峰宽都是一样的，为什么呢？

如Figure 2b所示，梯度条件是 5-100% B ，梯度时间是20min，
2a显示了梯度变化时，保留因子k（虚线）的变化以及峰宽（实线）的变化。
在梯度开始时，有机相比例低，保留因子k最大，峰还停留在柱头，峰宽为0，随着有机相比例的增加，物质开始柱子内移动，有机相比例不断增加，k值也一直下降，物质在柱子中不断移动直到流出。
峰1和峰2的保留时间虽然不一样，但其移动的模式是一样的，并且k的变化曲线也是一样的，所以在梯度洗脱条件下，其峰宽也是一样的。
1梯度洗脱等于无限个等度洗脱

figure 1a所示，条件是60%B的等度洗脱，我们会发现，在色谱的前端，峰并没有很好地分离，而在色谱的尾端，虽然峰分离的很好，但峰变的很宽。

如果降低B的比例，前面的峰的可以得到分离，而后端的峰宽将会变的更宽；如果提高B的比例，后端的峰可以快速流出，峰宽也会窄一些，但前端的峰会更加难以分离，所以，遇到这种情况，很难用等度洗脱得到很好的分离。
为什么会出现这种情况？通过计算，发现1a中样品的保留因子范围是0.9(34/0.9 ≈ 38),样品的极性差别很大，而通常等度洗脱的保留因子范围是1
figure 1b,梯度洗脱的条件是 50-100% in 5 min，会发现不论是前端还是后端，峰都得到了很好的分离，并且峰宽几乎是一样的
Figure 1c做了一个试验，将figure 1中分析的15种物质分成了5组，每组都是等度洗脱，B的比例分别是49%，61%，72%，80%和88%，每组的保留因子大概都是k等于3，峰宽也几乎一样，是不是和figure 1b很相似？如果将c中的等度洗脱的条件叠加，就是一个梯度洗脱，也就是说梯度洗脱可以理解为是有无数个比例变化很小的等度洗脱的叠加。
2梯度洗脱的窄峰宽和等峰宽
梯度洗脱的最大好处就是能够窄的峰宽，并且同一梯度内的峰宽都是一样的，为什么呢？

如Figure 2b所示，梯度条件是 5-100% B ，梯度时间是20min，
2a显示了梯度变化时，保留因子k（虚线）的变化以及峰宽（实线）的变化。
在梯度开始时，有机相比例低，保留因子k最大，峰还停留在柱头，峰宽为0，随着有机相比例的增加，物质开始柱子内移动，有机相比例不断增加，k值也一直下降，物质在柱子中不断移动直到流出。
峰1和峰2的保留时间虽然不一样，但其移动的模式是一样的，并且k的变化曲线也是一样的，所以在梯度洗脱条件下，其峰宽也是一样的。

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