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求助UPLC基线不平的问题

aomo

2016/03/31

液相色谱（LC）

本人是菜鸟，因购买UPLC是另一位同事，她调离，我临时接手。需要测试的是浮游植物色素组成，采用了经典的HPLC方法Zapata（2000）的色素分离的方法，A为甲醇/乙腈/吡啶水溶液（50:25:25，v/v/v）；流动相B为甲醇/乙腈/丙酮溶液（20:60:20，v/v/v），梯度洗脱程序：
时间 A% B%

0 100 0
22 50 50
28 20 80
40 5 95
43 5 95
43.1 100 0
45 100 0
使用色谱柱为Waters Symmetry C8色谱柱（3.5 μm，4.6×150 mm），加装 Symmetry C8保护柱。
目前的问题是基线随梯度变化，但是相同的方法在waters hplc上没有这么大的漂移具体见下图：

黑色为hplc出图，红色为uplc出图，请问各位专家，是什么原因？
图中黑色出峰为：Chlorophyll c2，Pheophorbide a，内标，Divinyl Chlorophyll a，Pheophytin-a，b-carotene
红色出峰为：Pheophorbide a，内标，Divinyl Chlorophyll a，Pheophytin-a，b-carotene，叶绿素c2未出峰

分
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symmacros

第1楼2016/03/31

应助达人

可能梯度条件需要调整。

0

aomo

第2楼2016/04/01

因使用的色谱柱是HPLC上的symmtry C8 所以就没有对梯度进行调整，我再调整下梯度试试。工程师来，直接给的结论是该方法不适用于UPLC，
symmacros(jimzhu) 发表:可能梯度条件需要调整。

0

hujiangtao

第3楼2016/04/01

应助达人

对于UPLC来说时间确实太长了

0

有水有渝

第4楼2016/04/01

应助达人

把UPLC当HPLC用，方法转换不完全，但基线会下降肯定是因为流动相变化引起的，不知道检测波长是多少，流动相中含大量吡啶、丙酮，在某些波长下这两物质都有明显的紫外吸收。
aomo(aomo) 发表: 因使用的色谱柱是HPLC上的symmtry C8 所以就没有对梯度进行调整，我再调整下梯度试试。工程师来，直接给的结论是该方法不适用于UPLC，

0

aomo

第5楼2016/04/01

检测波长是440，我查阅了下文献，吡啶和丙酮都是在350以下才吸收，感觉是压力的问题，我猜想hplc是不是在数据采集的时候考虑了压力的影响进行了数据修正，而uplc估计没有，因为uplc应用一般运行时间短。
有水有渝(xky0230699) 发表: 把UPLC当HPLC用，方法转换不完全，但基线会下降肯定是因为流动相变化引起的，不知道检测波长是多少，流动相中含大量吡啶、丙酮，在某些波长下这两物质都有明显的紫外吸收。

0

aomo

第6楼2016/04/01

关于叶绿素C2未出峰，也找到原因了，新买的柱子有问题，因为用同事的柱子，相同的条件，相同的运行梯度，相同的仪器旧柱出峰，新柱不出峰，感觉今年运气好衰

HPLC 红色为新柱，黑色为旧柱

UPLC 蓝色为新柱，黑色为旧柱
已给waters售后提出有问题，不知道能不能给我换柱子，买了还不到2月哎~~~

0

aomo

第7楼2016/04/01

请问专家，UPLC当HPLC ，方法怎么转换？我一点头绪都没有~~
有水有渝(xky0230699) 发表: 把UPLC当HPLC用，方法转换不完全，但基线会下降肯定是因为流动相变化引起的，不知道检测波长是多少，流动相中含大量吡啶、丙酮，在某些波长下这两物质都有明显的紫外吸收。

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夏天的雪

第8楼2016/04/02

应助达人

waters有专门的转换软件的，可以百度或者在论坛里找一下
aomo(aomo) 发表: 请问专家，UPLC当HPLC ，方法怎么转换？我一点头绪都没有~~

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