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色谱宏海微聊精湛——0504

一片枫叶

2016/05/28

液相色谱（LC）

有人把色谱比作宏海，但凡与海相联，自然会想到海的浩瀚深邃与奥妙；也有人把色谱说成圈，圈内是你知道的，圈是你不知道的，知道的越多圈越大，不知道的也就越多；还有人说色谱像人生轨迹，既有高潮也有低谷，蓄于了曲线的内涵，涵盖了完美的人生......
色谱的神奇，色谱的奥妙，吸引着人们对色谱知识的探讨，问题之多，交流之巧，赢得微聊气氛活跃！
No：1 安捷伦1290自动进样器（图片笔尖所指的位置）漏液，怎么办呢？

微微：找了两个图可以帮助你。

No：2 如何查看信噪比？

微微：峰高（mAU）/噪声6*SD（mAU）即为噪声比。
例：9.58245e-1÷1.500e-2=63.9
美国国家标准局的分类
　　(1)仪器检出限: 即相对于背景，仪器检测的可靠最小信号。通常用信噪比(S/N) 表示，当 (S/N)≥3时，定义为仪器检出限。
　　(2)方法检出限: 即某方法可检测的最小浓度。通常用外推法可以求得。即在低浓度范围内选三个浓度(C1、C2、C3) ，对每一浓度水平分别重复测定，求出各浓度水平的标准偏差 S1、S2、S3，用线性回归法做出拟合曲线，延长该线与纵坐标相交于S0(浓度为零时空白样品的标准偏差)。3S0则定义为方法检出限。
　　(3)样品检出限: 指相对于空白可检测的样品的最小含量。它定义为三倍空白标准偏差，即3σ空白( 或3S空白)。
No：3 方法验证做线性时，称样最小的那个点含量相差1.5% 其他5个点含量都好的，就称量最小的点有这个情况，重新称了一个样品还是这样。，但线性方程是好的，这样能符合要求吗？

图谱如下：

微微：你看下就知道为什么了。

因为你的横纵坐标的数量级差别太大了，斜率显示位数太少，一种是你斜率调整到小数点后四位换算，一种是更换数据的数量级。其实你的数据做得没问题，就是方程的斜率精度太低了，导致最后低浓度误差变大。

No：4 大家先别管我的峰好看不，帮我看看样品的那个峰到底是不是山梨酸啊，我跑色素的时候出的峰蛮好看的，一般识别时间带设置多少啊？我这个设置的是0.1分钟，结果就是未检出。
图一：标准品图谱

图二：样品图谱

微微：一般选择时间窗≤0.5%，时间窗和时间带是可以调节的，选择一个另一个变灰色不让改。

根据您的提示已更改

微微：嗯，你不用一下子就5%，当峰漂移比较厉害时可以调这么大。
问：时间窗和时间带有什么区别？
微微：时间窗更合理点，出峰时间更后面，一般漂移的更大，如果固定时间带可能前面的峰标的准确，后面的峰就标不准了。如图时间窗0.5%，重现性好，不漂移就可以设小点。
问：哦，好的，我的这个样品，时间窗调成百分之二就检出了，这个峰应该是山梨酸吧！我今天又走标品，时间跟昨天时间差不多，误差很小的。
我还有一个样偏了四分钟左右，时间窗调到百分之四就识别到了，好烦啊！
微微：标准品纯净，样品可能有其他东西影响了点出峰时间，但从你图谱上看可以认为是山梨酸，你可以把峰跌起来看看。如图：选择数据比较。

No：5 安捷伦1260 四元泵压力升高怀疑单向阀和purge滤芯污染
被动式入口阀

坼除管路和被动入口阀。

单向阀拆下来，里面有个滤芯的。这个滤芯贵啊，但好像可以去超声。

微微：1：配置流动相的瓶子最好专用，试剂最好色谱纯，需要过滤的选用合适的滤膜过滤。
2：仪器时常保养，通道不用也要时不时冲洗一下，管路容易脏，时常清洗。
3：有时候甚至需要用低浓度硝酸冲洗。
No：6 喹啉和酸性条件下的质子化喹啉是否影响保留和峰型，喹啉的PK=4.95
微微：1：100%的变化等于没有变化。
2：很多化合物和其盐酸盐的出峰时间峰型基本都一样，这里的峰型都很难控制，一般都需要稍微其它一点的条件。
3：酸性的条件，磷酸：0.1%的浓度，PH值大约2.2
4：流动相的PH值要比化合物的PKa大两个单位，化合物99%转化为一种分子状态，这个时候峰型是一样的，是在一个地方出峰的。
5：0.1%的磷酸水溶液和甲醇或者乙腈搭配，可以先有机相多一点60%。
No：7 只言片语
1：标样吸潮，外标法做样品含量偏高——标样吸潮，标样的实际含量降低，其峰面积减小，校正因子增大，所以外标法做含量偏高。
2：加入硫酸钠溶液后丙酮和石油醚分层——丙酮和石油醚是互溶的，它们的极性都不强，但由于丙酮羰基的存在，很容易形成氢键，当加入含有水的硫酸钠之后，形成了氢键使丙酮极性增大而溶于水中，同时由于硫酸钠的存在，使丙酮的硫酸钠水溶液比重增大，便与石油醚更容易分层了。
3：极性比较强的物质难以分离——a：加离子对试剂（离子对分为正离子对和负离子对，分析酸性样品用正离子对试剂，分析碱性样品用负离子对试剂），对色谱柱影响较大，一般少用。 b：用hilic色谱柱
No：8 图片欣赏
赛默飞离子色谱ICS5000

安捷伦1260四元泵

溶剂粘度与比例的关系

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m3112488

第1楼2016/05/29

受益匪浅

0

wyhkemeng

第2楼2016/05/29

受益匪浅

1

light2357302

第3楼2016/05/30

出现的问题还是比较典型的

0

我是风儿

第4楼2016/05/30

应助达人

很好的知识详解
m3112488(m3112488)发表:受益匪浅

0

brilliant0209

第5楼2016/06/04

真的很好，学习了

1

p3116089

第6楼2016/06/12

没有用过。。但我还是看完了，

1

拉菲

第7楼2017/01/07

学习了

0

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