JOE HUI
第2楼2024/03/12
首先,需要根据分离样品的特性和目的,选择合适的流动相和柱子。在确定流动相时,需要考虑其极性和溶解性,以及不同成分之间的相容性。在选择柱子时,需要考虑其填充材料、粒径和长度等参数,以及样品的分子量和化学性质。
其次,需要确定梯度程序的起始浓度、结束浓度和梯度时间。起始浓度应选择与样品相似的极性组分,以保证柱子的稳定性和分离效果。结束浓度应选择与样品极性相反的组分,以促进样品分离。梯度时间应根据柱子的长度和流速等参数进行合理设置,以避免柱子过早饱和或过度扩散。
最后,需要进行优化和调整。在实验中,可以通过调整梯度程序的参数、流速和温度等因素,来优化分离效果和保证柱子的寿命。同时,需要注意样品的洗脱和回收,以避免浪费和环境污染。
总之,液相色谱梯度设置是一项复杂而关键的工作,需要仔细考虑和实验验证。只有合理设置梯度程序,才能获得高效、准确的分离结果。
Ins_2e1e84f3
第4楼2024/03/15
1.待分析的物质是否已知结构,如果已知结构,就可以根据结构,推断物质的极性、溶解性、pKa紫外吸收波长等性质;如果未知结构,那就只能一点点去尝试。2.走一个5%甲醇—100%甲醇梯度,10-15min,观察出峰情况,判断目标物出峰的大致甲醇浓度。3.以以上判断的甲醇比例±20%为起止梯度,再走一个10-15min的梯度,进一步细化暮边屋出峰的甲醇比例。4.观察出峰数目和峰保留时间的差异,如果峰数量少,且分的很开,可以考虑等度洗脱。根据第3步判断的甲醇比例,±10%,为等度洗脱比例,观察出峰情况。尽可能保证分离度的情况下,以最短时间走完样品。5.如果出峰数量多,且部分峰的分离度不好,就要考虑梯度变化率、多梯度等,甚至从洗脱剂、添加缓冲盐、离子对试剂等等角度考虑优化。