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求助,枸橼酸离子含量检测

液相色谱(LC)

  • 药典中枸橼酸离子含量检测给出了2种液相色谱方法的检测,我们一直采用法二离子色谱法,现在研究方法三,具体方法如下:
    1.1.1 色谱条件
    紫外检测器;十八烷基硅烷键合硅胶填充色谱柱;柱温40℃;流速1.0ml/min
    1.1.2 流动相:为18.2mmol/L磷酸盐缓冲液,0.1%异丙醇溶液(pH2.0-2.5);紫外检测波长:210nm。
    1.1.3 系统适用性:
    取5.0mmol/L枸橼酸离子溶液20ul,注入色谱柱,拖尾因子按枸橼酸离子色谱峰测定应为0.95-1.40。
    1.1.4 枸橼酸对照品溶液的制备
    枸橼酸对照品溶液(5.0mmol/L、10.0mmol/L、15.0mmol/L):用分析天平精密称取经减压干燥至恒重的枸橼酸钠(C6H5Na3O7.2H2O)0.735g,置100ml量瓶中,用水溶解并稀释至刻度,用移液管精密量取5.0ml、10.0ml、15.0ml,分别置25ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得5.0mmol/L、10.0mmol/L、15.0mmol/L枸橼酸离子对照品溶液。
    1.1.5 供试品制备
    人纤维蛋白原:精密量取供试品1ml,加1.5%磺基水杨酸4.0ml,混匀,室温静置2小时以上,以每分钟3000转离心10分钟,取上清液,即得。
    1.1.6 分别依次取各对照品溶液20ul,供试品溶液20ul,分别进行色谱分析。
    1.1.7 采用外标法进行计算。
    以各对照品溶液的枸橼酸离子浓度对峰面积作直线回归求得回归方程,计算出供试品溶液中枸橼酸钠含量C(mmol/L),再乘以供试品稀释倍数(n)计算出供试品枸橼酸离子含量(mmol/L)。
    公式计算:
    供试品枸橼酸含量(mmol/L)= C×n
    式中 C为供试品溶液中枸橼酸离子含量
    n为供试品稀释倍数
    对于流动相的配置不知道该怎么配置合适,之前做过一次,方法是:磷酸二氢钾2.48g ,用水混匀,加0.1%异丙醇1ml,定容至1L。做出来的图杂峰很多,不知道哪里有问题
    有做过的老师,可以给点意见及建议吗?
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  • 有水有渝

    第1楼2016/10/12

    应助达人

    能把这个药品中的品名说一下吧,药典哪一部哪一页?

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  • 夏天的雪

    第2楼2016/10/12

    应助达人

    杂峰多是样品的杂峰多还是对照品溶液测定出来的杂峰就很多?

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  • 夏天的雪

    第3楼2016/10/12

    应助达人

    流动相可以尝试:磷酸二氢钾2.48g ,用水混匀,用磷酸调节pH2.0-2.5,然后加入1mL的异丙醇,并用水定容到1L。

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  • p3149706

    第4楼2016/10/13

    15版药典四部,通则3108 枸橼酸离子色谱法 ,228页,

    有水有渝(xky0230699) 发表:能把这个药品中的品名说一下吧,药典哪一部哪一页?

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  • p3149706

    第5楼2016/10/13

    之前是用的您说的方法制备的,就是有很多杂峰,所以想问问是哪一块造成的

    夏天的雪(bingwang228) 发表:流动相可以尝试:磷酸二氢钾2.48g ,用水混匀,用磷酸调节pH2.0-2.5,然后加入1mL的异丙醇,并用水定容到1L。

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  • p3149706

    第6楼2016/10/13

    只进的对照,配的枸橼酸对照品,但是有很多杂峰,所以不知道是对照品不造成的,还是流动相不合适

    夏天的雪(bingwang228) 发表:杂峰多是样品的杂峰多还是对照品溶液测定出来的杂峰就很多?

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  • 有水有渝

    第7楼2016/10/13

    应助达人

    这个流动相试试:磷酸二氢钾2.48g ,用水1L,溶解混匀,调节pH至规定值,再加入异丙醇1ml混匀,试试。
    楼主最好能上个图看看,进空白了吗?

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  • 夏天的雪

    第8楼2016/10/16

    应助达人

    上个图看一下,是什么样的杂峰,可以按照有水有渝老师的方法,进个空白试试,看有没有杂峰

    p3149706(p3149706) 发表: 只进的对照,配的枸橼酸对照品,但是有很多杂峰,所以不知道是对照品不造成的,还是流动相不合适

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  • fzw-1234

    第9楼2016/10/18

    这个流动相的配置对PH要求非常严格,PH不同对谱图影响很大;其次就是你的配置中0.1%异丙醇1ml至1L,最后其异丙醇的浓度就不是0.1%了,是0.0001%了,这是不是跟药店规定的有出入;再低波段的检测波长其实对水也是有要求的,有些轻微的波动也是正常的。供你参考!
    最好还是上传一张对照品的谱图看看,让大家帮你分析分析。

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  • p3149706

    第10楼2016/10/24

    上周更换了纯度高点的磷酸二氢钠配置流动相,杂质峰少很多,现在遇到的问题是高浓度的对照品拖尾因子不合格

    有水有渝(xky0230699) 发表:这个流动相试试:磷酸二氢钾2.48g ,用水1L,溶解混匀,调节pH至规定值,再加入异丙醇1ml混匀,试试。
    楼主最好能上个图看看,进空白了吗?

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