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流动相调制方法不同，对分析结果会产生显著影响！

lijing320323

2016/10/12

液相色谱（LC）

高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制？别不重视！因为，选择配制的方法不同，分析结果，特别是保留时间，是会有显著差别的!
一、有机溶剂和水性溶剂的混合方法
有机溶剂和水性溶剂的混合液作为流动相是经常的，但由于混合方法不同，有时分析结果相差很大。如20mM磷酸钠缓冲液（pH2.5）90%与乙腈10%的混合液，混合比为9∶1时，20mM 磷酸钠缓冲液（pH2.5）90%与乙腈10%的体积比为9∶1，也就是可以解释为各自按体积比例的相当量称取后进行混合。另外，按10%乙腈解释，用20mM 磷酸钠缓冲液（pH2.5），将乙腈稀释调制也可以成立。在后者情况下，产生混合体积减少部分，余下的添加20mM 磷酸钠缓冲液。两者虽然没有太大的差别，但由于混合方式不同，分析结果，特别是保留时间，也会有显著的差别，这点必须注意。
二、50%或（V/V＝1/1）乙腈水溶液的配制方法
对于用V/V＝1/1的表示配制乙腈水溶液，多按这种方法进行：用量筒测定乙腈500mL，用另一量筒测定水500mL，两种液体在瓶内充分摇晃混合。不过 50%乙腈水溶液的表示时，同样也多是按上述方法配制，但查化学辞典时，实际上是按这种方法进行配制：首先将500mL乙腈，注入1L的量瓶中，量瓶边搅拌边加水，等待液温达到室温，用全量水，使溶液到1L。这样一来，用%表示和“V/V”体积比表示，最终得出的流动相组成不同。也就是说，混合溶剂的密度，与由原溶剂密度计算的单纯平均值不相同，所以用上述两种方法调制的流动相组成差异。如在室温（25℃）附近水50mL和乙腈50mL混合时体积不是100mL，而有所减少，约为96mL。在一般情况下，多用操作简便的第一种方法。
三、溶剂体积的温度影响
如前所述，溶液的密度受周围温度的影响。刚从溶剂冷藏箱拿出来的溶液温度与实验室的室温相比，要低不少，乙腈和水混合液因发热反应，溶液温度升高。因此，为能调制再现性好的流动相，建议在使用前用水浴（或热水浴）将液温调到接近室温。

分
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牛一牛

第1楼2016/10/12

应助达人

赞一个，比较科普的资料。

0

武灵

第2楼2016/10/12

溶液配置方法、以及液温，确实或多或少会影响流动相配比，从而导致保留时间的变化。

0

jimmyc1979

第3楼2016/10/12

说显著我感觉有点夸张了，如个这样就会有显著的变化，那这个方法的耐用性也够差的了。

0

有水有渝

第4楼2016/10/12

应助达人

一般都直接使用体积比配制，即V1 V2，很少使用定容方式，主要是两都对分析结果的影响小，主要影响保留时间，流动相对分析比较显著的影响来自pH、盐浓度等，另外定法也有两个方法，是用水相稀释有机相还是用有机相稀释水相，这两种怎么选择，用体积比就没有这个歧义在。

0

xiaogezi

第5楼2016/10/12

个人认为不同的配制顺序或方式对液相结果的影响不同，但如果一直按照一个方法来做，那么就无所谓了把，除非有特殊规定的流动相

0

夏天的雪

第6楼2016/10/12

应助达人

固定一种配制方法就行，改变配制方法可能会导致保留时间的漂移

0

夏天的雪

第7楼2016/10/12

应助达人

楼主的帖子可以和枫叶老师的帖子共同学习
http://bbs.instrument.com.cn/topic/6241290

0

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