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畜禽肉中盐霉素、莫能菌素残留分析方法

海润Kevin

2017/08/14

私聊

液质联用（LCMS）

一、背景
1.1莫能菌素﹝Monensin﹞是聚醚类离子载体抗生素，是一种反刍动物中运用较广泛的饲料添加剂；原为链霉菌所分泌的一种物质，具有控制瘤胃中挥发性脂肪酸比例，减少瘤胃中蛋白质的降解，降低饲料干物质消耗，改善营养物质利用率和提高动物能量利用率等作用。
1.2莫能菌素为百盛客户对肉类原料中兽药残留的监控项目，为了应对客户要求，满足实验室检测要求，对莫能菌素进行新项目技术开发。盐霉素为原有分析项目，此次技术开发对盐霉素前处理及仪器分析条件重新优化，与莫能菌素合并同为聚醚类抗生素检测检测方法。

二、前处理流程
2.1提取
称取（2.00±0.02）g样品，加入10mL乙腈混匀，再加入3.00g无水硫酸钠，震荡混匀，超声提取10min；离心取上清液于50mL离心管中，残渣加入5mL乙腈重复提取，合并两次上清液，定容至20mL，加入5mL乙腈饱和正己烷，震荡离心。
2.2净化
取下层（乙腈层）5mL于圆底烧瓶中，旋转蒸发至1mL，氮气吹干。
普通肉类基质：圆底烧瓶中加入1mL乙腈超声溶解。
内脏类基质：圆底烧瓶中加入3mL甲醇+水（1+1）超声溶解，过Waters HLB柱（waters oasis HLB 6cc/200mg依次用5mL甲醇 5mL水活化），用5mL水淋洗，5mL甲醇洗脱于100mL圆底烧瓶中，40℃减压蒸干，加入1mL乙腈超声溶解。
三、仪器分析条件（LC-MSMS8050）
3.1质谱参数：
离子源ESI源; Nebulizing Gas Flow: 3 L/min; HeatingGas Flow: 10 L/min; Interface Temperature 300 ℃；DLTemperature 250 ℃；Heating Block Temperature 400℃ Drying Gas Flow: 10 L/min

化合物名称	Precursor m/z	Product	Dwell Time	Q1 Pre	CE	Q3 Pre
化合物名称	Precursor m/z	m/z	(msec)	Bias(V)	CE	Bias(V) 1
莫能菌素	688.6	635.50*	100	-26	-18	-28
	688.6	461.35	100	-26	-26	-30
	688.6	617.5	100	-26	-24	-28
盐霉素	773.1	431.20*	100	-28	-53	-28
	773.1	531.35	100	-28	-46	-36
	773.1	413.2	100	-28	-53	-27

3.2液相参数：
流动相组成：A: 0.1%甲酸 B: 乙腈；流速：0.35Ml/min；A -10% B -90%恒流分析；进样量：2uL；色谱柱型号：ODS-III 1.6μm
四、实验结果及分析
4.1线性
配制盐霉素、莫能菌素混标（稀释溶剂：乙腈），0.1ug/kg、1ug/kg、5ug/kg、10ug/kg、20ug/kg五个浓度点，仪器分析线性如下：

以上实验中，盐霉素、莫能菌素标准曲线R²均大于0.99，各浓度点精密度良好；仪器分析标准品线性、稳定性符合实验要求。
4.2选择性
选取牛肉样品进行空白、添加回收实验，实验谱图如下：

4.3真度
对空白牛肉进行前处理，采用空白样品萃取液与溶剂稀释统一标准品标准品，同一浓度下两者峰面积比值的百分比作为真度评价参数，实验结果及谱图如下：

基质类型	化合物名称	基质稀释标准品	溶剂稀释标准品	真度（%）
牛肉	盐霉素	116,440	107,537	106.4%
牛肉	莫能菌素	9,845	13,312	74.0%

以上实验中牛肉基质对盐霉素无明显基质效应，对莫能菌素产生一定的基质效应，基质效应在70%左右，在可接受范围之内，日常分析准确定量可以做spiked校正。
6实验总结

本次试验，从前处理、仪器分析、实验分析的真度、精密度、准确度等多项参数验证了此方法的适用性及准确性，可初步满足试验要求，后续继续多基体验证。

分
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