全信书不如无书——记一次失败的“照葫芦画瓢式”方法开发

图1 5ppm桔青霉素全扫描图谱

图2 50ppm桔青霉素全扫描图谱

图3 文献中GC参数

图4 50ppm桔青霉素SIM图（按文献报道方法）

没过多久，新标准物质回来，重新配制标准溶液，照着文献方法重新做一遍，问题依旧！起码说明标准物质没问题，那么照着文献为什么就做不出来？其后，撇开文献，按照完全未知化合物，按照全扫描-母离子扫描-产物离子扫描及碰撞能量优化-MRM模式进行了方法摸索，结果还是做不出来，此时，我甚至都有点儿怀疑仪器故障了，或是老天再跟我开玩笑。明明人家可以轻松的做出来，我为啥就做不出来呢？

回过头来，再重新仔细认真的阅读文献，发现一个重要问题！如图3所示，文献中EI源是在12eV条件下进行的，常规情况下，我们的气质大多是70eV。 好么，终于让我找到原因了，赶紧修改离子源参数，问题又来了，12eV情况下调谐根本通不过！这下又傻眼了，此时，我意识到为啥没找到有关用气质做桔青霉素的中文文献了，后来，咨询了不少同行，又追踪查阅了有关桔青霉素性质和测定的文献，结论就是：桔青霉素真的不适合使用气质方法进行测定。还是老老实实的要么用液相荧光检测器，要么用液质进行测定。

继续。。。

有朋友疑问，既然NIST谱库中有桔青霉素（英文名：Citrinin，CAS号：518-75-2），为什么做不出来呢？实际上，这个问题一直困惑着我。我们都知道NIST谱库是建立在70eV的EI源下获得的图谱。多数情况下NIST谱库还会列出所示图谱的仪器条件及参数等。偏偏这个桔青霉素的NIST谱库中只包含了谱图没有仪器条件参数。如下图5。

[img]https://ng1.17img.cn/bbsfiles/images/2024/03/202403221802092453_2355_1234_3.png

图5 桔青霉素NIST谱库中图谱（NIST14，Mainlib）

桔青霉素NIST谱库中的文字描述如下：

Name: Citrinin
Formula: C13H14O5
MW: 250 Exact Mass: 250.084124 CAS#: 518-75-2 NIST#: 241948 ID#: 209559 DB: mainlib
Other DBs: RTECS, HODOC, NIH, EINECS
Contributor: Japan AIST/NIMC Database- Spectrum MS-IW-6622
InChIKey: CQIUKKVOEOPUDV-IYSWYEEDSA-N Non-stereo
10 largest peaks:
250 999 | 206 882 | 217 660 | 232 488 | 204 442 |
191 308 | 203 270 | 214 233 | 251 210 | 190 187 |
Synonyms:
1.3H-2-Benzopyran-7-carboxylic acid, 4,6-dihydro-8-hydroxy-3,4,5-trimethyl-6-oxo-, (3R-trans)-
2.4,6-Dihydro-8-hydroxy-3,4,5-trimethyl-6-oxo-3H-2-benzopyran-7-carboxylic acid
3.Antimycin
4.Citriain
5.3H-2-Benzopyran-7-carboxylic acid, 4,6-dihydro-8-hydroxy-3,4,5-trimethyl-6-oxo-
6.(3R,4S)-4,6-Dihydro-8-hydroxy-3,4,5-trimethyl-6-oxo-3H-2-benzopyran-7-carboxylic acid
7.8-Hydroxy-3,4,5-trimethyl-6-oxo-4,6-dihydro-3H-isochromene-7-carboxylic acid #

Estimated non-polar retention index (n-alkane scale):
Value: 2052 iu
Confidence interval (Diverse functional groups): 89(50%) 382(95%) iu

我们只能看到这张NIST图谱的贡献者是Japan AIST/NIMC Database- Spectrum MS-IW-6622，同时InChIKey所对应的在NICB PubChem的连接如下：

https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/54680783#section=Top

这样一路追踪检索下来，很遗憾，没能找到桔青霉素NIST图谱对应的仪器条件，但我相信这个图谱是在70eV轰击下做出来的。

至此，此次实验得出几个教训：其一，文献报道只能作为工作中的一种参考工具，不可完全依赖文献，要有怀疑精神；其二，化合物与CAS并非一一对应的关系，由于历史原因，可能一个化合物对应多个CAS号，但是，一个CAS号不可能对应多个化合物；其三，NIST谱库中的图谱大多数有仪器条件参数可查，但有少部分化合物没有列出采集方法。其四，科技发展到今天，还没有一种仪器是通吃所有化合物的，万能的。从作为方法开发者的角度来讲，恨不得一台仪器，一次前处理，一次上机测试，能同时检测尽可能多的化合物，这个想法没有错，但不能盲目，有时候前处理能满足同时提取了，但受制于仪器类型或检测器类型或检出限等制约，无法同时测定；或者有时候仪器条件参数能满足同时测定多个化合物了，但受制于提取步骤或净化步骤或回收率等因素，前处理方法无法合并在一起。尽管，现如今对于农药残留测定来说，乙腈作为提取溶剂的QuEChERS方法是个大趋势，但此法也有软肋，比如无法处理大体积水样、某些化合物回收率低，部分化合物因存在相互反应或相互干扰不能放在一起检测等。

可能还有一些东西没能写进来，慢慢在回帖中补充吧。

希望大家在今后的方法开发和检测工作中一切顺利！

（完）