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安捷伦1260液相同一样品连续进样峰面积逐渐增大

Illidanfay

2017/11/22

液相色谱（LC）

各位朋友好，现在我用液相分离一个多肽样品，但是我自己摸索的方法现在出现一个问题就是同一样品连续进样主峰的峰面积会慢慢增大，第一针峰面积16500，第二针就是16580，第三针16670，每次进样峰面积都增加50到100不等，无法做重复性实验了。
我用的流动相是A：95%水+5%ACN+0.1%TFA；流动相B：90%ACN+10%水+0.1%TFA，柱子用的是C18的柱子，我是从0min开始到30min用梯度洗脱，后面用流动相B冲洗10min，然后回到初始条件平衡10min，然后开始走下一针样品；
出峰时间没有太大变化，只有0.02min的浮动；
一开始以为是柱温的问题呢，后来试过了20，30,40,50度这几个发现都一样，还是不断增大；
仪器没问题，因为前面用不同的方法走其他的样品的时候重复性是很好的；
我在这个条件的基础上增大梯度的陡度或者开始进样的时候增加一个等度平衡体系发现都没有什么用，峰面积依然逐渐增大；
我开始以为柱子的问题，然后换成C8的柱子，用这个方法走同样的样品依然是这样的情况；
请教一下有经验的朋友这是不是我的洗脱条件的问题，是否需要更换流动相或者说更换梯度的比例，如果是的话应该从哪儿来入手找到问题的所在，谢谢！

分
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Illidanfay

第1楼2017/11/22

柱子是新买的，应该不是柱效有问题吧。。

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Illidanfay

第2楼2017/11/22

样品是用10%乙腈溶解的，不是挥发性溶剂，进样器控温在4℃

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weiweijunling

第3楼2017/11/22

应助达人

考虑下样品在稀释剂中的稳定性怎么样。

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weiweijunling

第4楼2017/11/22

应助达人

针上是否有残留，洗针液的选择是否合适，是否能洗下针上残留的样

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飘殇

第5楼2017/11/22

感觉应该在进样或是进样器方面找找问题。样品瓶盖是不是预开口的，如果不是预开口的跟样品瓶盖的拧紧程度可能也有点关系。

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国飚

第6楼2017/11/22

感觉应该是进样器的问题，做完一针走个空白看看。

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Illidanfay

第7楼2017/11/23

我每次换新的样品检测都是一样的结果，样品还是比较稳定的，我做过在酸、碱、氧化剂中都比较稳定。。
weiweijunling(weiweijunling) 发表:考虑下样品在稀释剂中的稳定性怎么样。

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Illidanfay

第8楼2017/11/23

我倒是没有设置洗针，直接让它连续进样检测的，谢谢你的提醒，我去设置一下洗针的程序再检测一下看看什么结果。。。
weiweijunling(weiweijunling) 发表:针上是否有残留，洗针液的选择是否合适，是否能洗下针上残留的样

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Illidanfay

第9楼2017/11/23

就是用的安捷伦的进样瓶，盖子也是预留的有口的盖子，我没用垫片。。。。我再设置一个洗针的程序来看看结果怎么样。。
飘殇(zx08052109) 发表:感觉应该在进样或是进样器方面找找问题。样品瓶盖是不是预开口的，如果不是预开口的跟样品瓶盖的拧紧程度可能也有点关系。

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Illidanfay

第10楼2017/11/23

我走完样品走空针在主峰出峰那个位置没有吸收的，不知道我觉得应该不是柱子有残留，因为我在条件里面设置冲洗两个柱体积，应该都冲洗下来了吧。。。
国飚(v3225618) 发表:感觉应该是进样器的问题，做完一针走个空白看看。

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