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液相色谱测食品中玉米赤霉烯酮的心得

  • zhaoxiaozi
    2017/12/14
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 我从2016年开始接触液相,做的就是食品中玉米赤霉烯酮的检测。用的仪器是安捷伦的1200,带荧光检测器。上机都没有什么好说的,按照省疾控给的操作手册来,有时候仪器不同具体的技术参数也不太一样,但是不会偏差太大。主要说一下前处理。
    手册要求的前处理是用90%乙腈+水来提取,将样品和提取液和5gNACl加入具塞三角烧瓶中萃取,然后加水稀释过柱子,过好柱子后加10mL蒸馏水,抽干后用1mL甲醇洗脱,氮吹干后用1mL乙腈溶解过滤上机。手册给了两种萃取方案,一个是涡旋混匀,一种是摇床。由于涡旋震荡一次只能震荡一个三角烧瓶,但是摇床却可以放十几个,而且做加标回收发现两者的回收率基本上没什么差异,都在95%-99%之间。于是2016年就用的手册的方法来,到了2017年时间比较紧,我决定用50mL离心管萃取。而且想了一下NaCl的作用,一般有机萃取过程中加NaCl就是为了防止乳化,但是操作过程中发现无论加不加NaCl食用油都会加水后出现乳化现象,但是这个乳化并不影响过柱子,让我比较意外。所以后来就不加NaCl了,这样也省去了后面加10mL蒸馏水洗脱无机盐的过程,节省了时间。再就是氮吹,经过氮吹后发现回收率会下降,10-20个百分点那种下降,到后来就干脆不氮吹,直接用甲醇过膜上机,效果比氮吹后上机好得多。
    还有一个就是:柱子回温问题,我们用的是北京华安麦科的免疫亲和柱子,说明书上写的是回温半个钟头到室温,刚开始为了节省时间,直接在温水里面回温,发现效果不好,回收率低,后来打电话问厂家,厂家说的是回温一定要再室内常温情况下回温,为的是让免疫蛋白回复亲和性,并不是迅速到常温就能解决,一定要慢慢回温,让蛋白回复过来。这也算是为了走捷径但是走了弯路了,这个大家不要向我学习。在不安手册或者国标方法操作之前一定要明白这一步操作的意义是什么,不要盲目跃进。
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  • Kevin

    第1楼2017/12/14

    感谢分享个人心得

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  • 夏天的雪

    第2楼2017/12/14

    应助达人

    感谢楼主分享,非常使用。样品提取的过程可以选择在离心管中进行,过滤之前先离心;过柱的时候速度不能太快;最后用甲醇洗脱之前先将水抽干,然后用甲醇洗脱;上机前可以只用用洗脱液定容后上机测定,溶剂替换控制不好就会有损失。过柱前一定要使滤液干净,否则过柱会很费劲。不知道楼主对这一块有没有什么好的建议。

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  • zhaoxiaozi

    第4楼2017/12/15

    应助达人

    最主要的:那个拍砖咋取消?实验具体过程描述不了太详细,不好意思,就是坐这里没事干随便想到哪写到哪。上甲醇之前抽水这个比较重要。过滤时后用普通滤纸一层就行了,之前都不用离心,小心点倒上清液我一般就是少点加,都不用玻璃漏斗(实验室没有那么多漏斗,见笑了。),直接滤纸叠好往里面少点倒,滤液够了就可以稀释了,油类的就不过滤了,直接取上清液。过柱速度我自己的体会是不影响,也有可能不同厂家的柱效不一样,我就是开最大自然往下滴,快的一秒三滴吧好像,结果没多大区别。总的来说,ZEN属于超好做的,实验过程不一定按操作手册来,小改动不会有大影响甚至没有影响的。再就是发现看结果居然能看到花生油里面的黄曲霉毒素,不知道您注意过没有,这个还是让我比较意外。

    夏天的雪(bingwang228) 发表:感谢楼主分享,非常使用。样品提取的过程可以选择在离心管中进行,过滤之前先离心;过柱的时候速度不能太快;最后用甲醇洗脱之前先将水抽干,然后用甲醇洗脱;上机前可以只用用洗脱液定容后上机测定,溶剂替换控制不好就会有损失。过柱前一定要使滤液干净,否则过柱会很费劲。不知道楼主对这一块有没有什么好的建议。

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  • 夏天的雪

    第5楼2017/12/20

    应助达人

    这个项目我们的样品量不多,即使有黄曲霉也是分开做的,但是免疫亲和柱一般会有专一性,黄曲霉理应不能保留啊

    zhaoxiaozi(zhaoxiaozi) 发表: 最主要的:那个拍砖咋取消?实验具体过程描述不了太详细,不好意思,就是坐这里没事干随便想到哪写到哪。上甲醇之前抽水这个比较重要。过滤时后用普通滤纸一层就行了,之前都不用离心,小心点倒上清液我一般就是少点加,都不用玻璃漏斗(实验室没有那么多漏斗,见笑了。),直接滤纸叠好往里面少点倒,滤液够了就可以稀释了,油类的就不过滤了,直接取上清液。过柱速度我自己的体会是不影响,也有可能不同厂家的柱效不一样,我就是开最大自然往下滴,快的一秒三滴吧好像,结果没多大区别。总的来说,ZEN属于超好做的,实验过程不一定按操作手册来,小改动不会有大影响甚至没有影响的。再就是发现看结果居然能看到花生油里面的黄曲霉毒素,不知道您注意过没有,这个还是让我比较意外。

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  • zhaoxiaozi

    第6楼2017/12/21

    应助达人

    只是怀疑是,因为出来的峰,和其他样品对比来看怀疑可能是黄曲霉毒素,具体是不是由于没有标样,没办法判断。

    夏天的雪(bingwang228) 发表: 这个项目我们的样品量不多,即使有黄曲霉也是分开做的,但是免疫亲和柱一般会有专一性,黄曲霉理应不能保留啊

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  • 夏天的雪

    第7楼2017/12/25

    应助达人

    很有意思的现象, 下次测试的时候注意一下

    zhaoxiaozi(zhaoxiaozi) 发表: 只是怀疑是,因为出来的峰,和其他样品对比来看怀疑可能是黄曲霉毒素,具体是不是由于没有标样,没办法判断。

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  • 苏微公司

    第8楼2018/07/24

    下次可以拿zen柱子过个黄曲霉毒素标准溶液,看看是不是黄曲霉,如果是就考虑把华安麦科给换了,可以考虑考虑我们家的免疫亲和柱 哈哈哈O(∩_∩)O哈哈~

    zhaoxiaozi(zhaoxiaozi) 发表: 只是怀疑是,因为出来的峰,和其他样品对比来看怀疑可能是黄曲霉毒素,具体是不是由于没有标样,没办法判断。

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  • Insp_213a90f1

    第9楼2018/11/15

    如果完全按照国标做,稀释倍数太高了会不会影响最后测定的结果呀?我是第一次做,不是用的免疫亲和柱,而是用的净化管,这样会影响测定结果吗?

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  • 夏天的雪

    第10楼2018/11/16

    应助达人

    应该会,玉米赤霉烯酮的含量不是很高,稀释倍数大了可能会低于检出限,感觉还是免疫亲和柱做好一些

    Insp_213a90f1(Insp_213a90f1) 发表:如果完全按照国标做,稀释倍数太高了会不会影响最后测定的结果呀?我是第一次做,不是用的免疫亲和柱,而是用的净化管,这样会影响测定结果吗?

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  • Insm_8cb08207

    第11楼2019/08/12

    楼主,问个问题,有碰到过同一个人处理,有时会有一个样品出峰会提前很多,还有就是标准曲线会突然出现前沿峰并且矮胖,但先前的标准曲线进样和样品出峰正常,排除了柱子和仪器的问题,问题出现了在新的标准曲线上

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