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【求助】固相萃取小柱的使用

  • milk123456
    2006/12/18
  • 私聊

液相色谱(LC)

  • 请教各位,C18固相萃取小柱使用时应注意什么,怎样活化?我做的加标实验回收率特别低。
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  • hxlsx

    第1楼2007/01/20

    含水量大的溶剂活化,强溶剂洗脱收集

    回收率低可能待测物未吸附,也可能洗脱时未洗脱,需要找原因

    milk123456 发表:请教各位,C18固相萃取小柱使用时应注意什么,怎样活化?我做的加标实验回收率特别低。

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  • suelly94406

    第2楼2007/01/20

    具体要看你萃取小柱的使用说明以及你样品的性质了.
    1、一般是采用甲醇来活化,用真空或是用注射器给一个压力,需要赶走柱内的气泡.
    2、然后用弱的溶剂来平衡,一般采用水或缓冲液.
    3、上样,注意这步的流速不能太大,否则样品没有和填料充分交换,会影响回收率的.
    4、以上几步需注意溶液的液面,不能抽干.
    4、洗杂质,根据你样品的性质,洗脱溶剂的强度和pH的选择应是保证能尽可能的洗去杂质而不会洗下你样品为好。可以做一下洗脱曲线,找到最佳的溶剂。
    5、洗脱样品,可以选择相对较强的溶剂,保证你的样品能充分洗脱下来,收集洗脱液,我们一般采用纯甲醇或乙腈,若需富集的话,可以挥干后再进样。

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  • 家有宝贝儿

    第3楼2007/01/20

    一般用甲醇活化,再平衡。
    进样的时候要注意流速,要匀速,而且不能太大。

    milk123456 发表:请教各位,C18固相萃取小柱使用时应注意什么,怎样活化?我做的加标实验回收率特别低。

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  • einein123

    第4楼2007/01/30

    好资料,谢谢分享

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  • 风之彩

    第5楼2007/01/31

    选择洗杂质的溶剂时,可多选择几个有机相和水相的比例,几个pH值的溶剂来洗脱,比较样品回收率和杂质峰大小,权衡一下,选择合适的比例。
    洗脱液也是一样,不一定纯甲醇或乙腈洗脱就好,可以摸下,我上次做的就是95%的甲醇比纯甲醇效果好。
    杂质多的话,可以先用一定浓度的有机溶剂沉淀一下蛋白,上清再上样,但是要注意加入有机溶剂的比例,保证上样后不会被直接洗脱。

    suelly94406 发表:具体要看你萃取小柱的使用说明以及你样品的性质了.
    1、一般是采用甲醇来活化,用真空或是用注射器给一个压力,需要赶走柱内的气泡.
    2、然后用弱的溶剂来平衡,一般采用水或缓冲液.
    3、上样,注意这步的流速不能太大,否则样品没有和填料充分交换,会影响回收率的.
    4、以上几步需注意溶液的液面,不能抽干.
    4、洗杂质,根据你样品的性质,洗脱溶剂的强度和pH的选择应是保证能尽可能的洗去杂质而不会洗下你样品为好。可以做一下洗脱曲线,找到最佳的溶剂。
    5、洗脱样品,可以选择相对较强的溶剂,保证你的样品能充分洗脱下来,收集洗脱液,我们一般采用纯甲醇或乙腈,若需富集的话,可以挥干后再进样。

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