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【仪器故事】记录一次基线异常排除---Zetasizer μV与SEC联用

  • lu_sunshine
    2018/08/10
    • 私聊

凝胶色谱（GPC）

  • Zetasizer μV是MalvernPanalytical物性表征仪器家族中一款精巧设备。通过其官网，我们可以看到它主要功能是测量流体力学直径，预估算分子量，DLS和SLS功能切换……在生物研究，药物蛋白单抗行业有广泛用途。

    目前，它越来越多的被应用到与HPLC/SEC联用中。本文记录一次在作为SLS detector与Agilent1290 system SEC联用时，基线异常并排除的过程。（ZetasizerμV单独应用测试DLS功能，基本免维护）以方便大家参考操作。
    故障现象：
    我们来看看下面五张色谱图，其中绿色为光散射LS信号，紫色为DAD信号。同时为研究方便，不仅给出了全景色谱图(a),还特意把LS信号做了放大镜放大效果图（b）处理：


    色谱峰（a） 放大LS基线（b）
    在较纯净的PBS溶液体系下，基线稳定在46-47mv左右，符合指标要求


    解决过程：

    1，从信号变化判断问题：
    从图一到图二我们可以观察到：DAD检测器信号没有变化，因流动相体系是PBS溶液体系，在280nm情况下，如果没有发生较大变化，基线不会发生明显改变。所以，DAD检测器基本正常；
    LS信号出现明显的噪音，光散射信号的灵敏度远远高于UV信号（LS信号正比于溶剂的dn/dc2）。所以怀疑是流动相发生了变化，例如大颗粒灰尘，长细菌等……
    2，通过改变流动相和单独DLS排除法，印证故障原因：
    经过了解，PBS流动相是现配现用的。但是没有根据要求用PES或者CA滤膜过滤三遍。并且中间用甲醇或者乙腈冲洗过系统。所以我们重新过滤纯水并且用更加稳定和纯净的丙酮来清洗整个系统。从图三的结果上看，LS明显改善好转。
    同时，用DLS功能做了200nm的标样验证。结果完全符合要求，排除了仪器本身原器件问题；
    3，色谱峰正常，仪器恢复正常：
    经过较长时间的冲洗和流动相转换，重新配置并按照要求用合适的滤膜过滤流动相。最终我们排除了故障。色谱峰正常，实验得以继续进行。
    结论和探讨：
    结论：
    1，相同色谱条件下，LS信号灵敏度远远大于DAD，故光散射对溶剂的纯度要求更高；
    2，出现基线问题时，需要从现象着手，推知原因，找到条件变化，依次考虑从简单方法入手；
    3，用排除法，验证故障原因是一种好方法，事半功倍；
    讨论：
    1，寻找故障原因是一个较长过程，需要有更大的耐心，尤其是基线噪音这类问题；
    2，解决故障要一步一步做，并且每一步要做到位。例如，用纯水冲洗PBS系统，需要3-5个柱体积，不要越庖代俎……
    3，细节决定成败，在用纯水冲洗时，基线变化时一个缓慢过程，但是有细微变化好转；看似一个过滤的细节没有做到位，会产生异响不到的后果；
    4，本系统为Agilent1290与MalvernPan Zetasizer μV联用，需要对整套设备有清醒认知，才能更好的解决……
  • 精
  • 该帖子已被管理者-小不董设置为精华，下面是奖励记录：加20积分,加5声望
相关话题
    +关注 私聊

  • lu_sunshine

    第1楼2018/08/10

    应助工程师

    终于发上来了，不容易啊。有图的全文在附件里面……请版主帮忙修正。

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    +关注 私聊

  • 小不董

    第2楼2018/08/13

    应助达人

    基线好了，GPC才能做好，楼主经验丰富。这LS选择的多少角度的？

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    +关注 私聊

  • lu_sunshine

    第3楼2018/08/13

    应助工程师

    可以根据需要连小角，直角，以及多角MALS……

    小不董(doxw0323) 发表:基线好了，GPC才能做好，楼主经验丰富。这LS选择的多少角度的？

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    +关注 私聊

  • 小不董

    第4楼2018/08/27

    应助达人

    单独的DLS能做粒径分布，GPC-DALS能做出粒径分布吗？

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    +关注 私聊

  • lu_sunshine

    第5楼2018/08/27

    应助工程师

    可以的，要相应型号的设备。micro-v没问题??

    小不董(doxw0323) 发表:单独的DLS能做粒径分布，GPC-DALS能做出粒径分布吗？

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    +关注 私聊

  • zyl3367898

    第6楼2018/09/02

    应助达人

    很实用，基线正常才能进样。

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    +关注 私聊

  • 夏天的雪

    第7楼2018/09/04

    应助达人

    液体、气体的纯度都会影响到基线噪音

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    +关注 私聊

  • lu_sunshine

    第8楼2018/09/04

    应助工程师

    但是LS比其他检测器都敏感，例如本例子，UV很正常，基本没变化；但是LS变化较大，往往让人认为仪器问题。排除过程是要耗费巨大时间的…

    夏天的雪(bingwang228) 发表:液体、气体的纯度都会影响到基线噪音

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    +关注 私聊

  • lu_sunshine

    第9楼2018/09/04

    应助工程师

    能有帮助就好

    zyl3367898(zyl3367898) 发表:很实用，基线正常才能进样。

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