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waters测有机酸,柠檬酸和琥珀酸出峰时间一样

液相色谱(LC)

  • 问题:用waters测有机酸时,柠檬酸和琥珀酸的出峰时间接近,峰型分不开。
    描述:流动相为95% 5mM H2SO4 + 5% 甲醇,流速0.4ml/min。测定五种有机酸(草酸,苹果酸,柠檬酸,琥珀酸和富马酸)。样品和标品均用超纯水溶解。之前一直用这个体系,混标能出现5个分离的峰,可是现在变成四个了,发现是柠檬酸和琥珀酸混一起了。
    这个问题该怎么解决?
    所有药品和流动相均重新配制也还是不能分离开柠檬酸和琥珀酸。
    柱子是伊力特Hypersil BDS C18, 4.0×150mm
    下图是第一次做,分离得很好的

    之后即使把流速换成0.2ml/min,也没分离开
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  • 夏天的雪

    第1楼2018/10/11

    应助达人

    用长柱,这两个应该可以分开的,还有调ph值

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  • 陈少灿

    第2楼2018/10/11

    谢谢回复。我换了安捷伦的长柱,然后单测柠檬酸和琥珀酸的出峰时间,也还是一样。调pH值的话,具体步骤呢?比如我现在是5mM H2SO4,给它换成20mM H2SO4可以吗?

    夏天的雪(bingwang228) 发表:用长柱,这两个应该可以分开的,还有调ph值

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  • 小平

    第3楼2018/10/11

    应助达人

    老师,您好,从图上来判断应该是因为柱效下降导致的。有两个建议,一建议您换柱子,二建议您换流动相,流动相用的是强酸,pH值太低,已经超过了仪器和柱子的耐受范围,很容易导致柱效下降,用不了多长时间柱子就会坏。

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  • 初心

    第4楼2018/10/11

    应助达人

    是柱子的问题,换新柱做吧,你的流动相体系酸度大,伤柱子

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  • weiqing

    第5楼2018/10/11

    应助达人

    如果换了色谱柱还是效果不好的话,可以换长柱或者串联两根柱子试一下。

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  • 检测老菜鸟

    第6楼2018/10/13

    应助达人

    如果单标都走在一起的话,我建议先考虑标准品的问题,我们遇到过一次,发错标准品了,出峰位置重叠。因为你的流速已经够慢了

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  • sdlzkw007

    第7楼2018/10/13

    应助达人

    建议更换色谱柱和流动相

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  • moviehua

    第8楼2018/10/15

    应助工程师

    调节Ph值,先3-7-10, 然后再细化摸索。

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  • 陈少灿

    第9楼2018/10/23

    感谢大家的回复。在柱子耐受范围内,我试验了10-8-4-2mM的H2SO4,这四个浓度只有2mM能明显分开,谢谢大家

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  • 夏天的雪

    第10楼2018/10/23

    应助达人

    能分开就好,可以尝试不用硫酸,用磷酸盐缓冲溶液,pH值在2.5到3之间

    陈少灿(v3220400) 发表:感谢大家的回复。在柱子耐受范围内,我试验了10-8-4-2mM的H2SO4,这四个浓度只有2mM能明显分开,谢谢大家

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