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化学药品分析方法验证测试部分设计思路

影子

2018/10/13
分析者端木卓越队

常用设备综合讨论

化学药品分析方法验证测试部分设计思路
平常看到的基本上是某个具体物质的分析方法验证，其做法当然会有所不同，根据本人日常工作的经验与需求，更多的是关注验证测试操作的部分，一旦考虑不周，可能就得重新来做；如果实验部分提前设计好了，测试操作会顺畅得多，对实验室数据的完整性也是大有益处，往往能起到事半功倍的效果。本人在日常工作中，常常遇到由于考虑不周，导致多次收到客户或官方关于分析方法验证的补充要求；本次为了参加原创大赛凑数，特结合日常注册经验以及与下游客户打交道的经验，在此谈一谈分析方法验证时关于测试部分的设计思路，以便于制定一个漏洞不算太多、注册之后不至于被客户或官方挑出太多毛病的分析方法验证方案。
以某原料药（以下简称为A）中颇为复杂的有关物质分析方法（假定该方法中除纯度外，有2个限度标准均为0.2%的已知杂质）为例，所用仪器设备为HPLC。我们知道，分析方法的验证在中国药典附录9101、美国药典附录1225、ICHQ2中都有描述，基本验证项目包括专属性、线性与范围、准确度、精密度、检测限、定量限、耐用性；除此之外，溶液稳定性也是必不可少的，对于有关物质测试项目，降解试验的研究也是非常关键的。当然，一个好的验证方案里面必须要有人员职责分配、培训、所需试剂清单及级别、设备的验证情况、分析条件、溶液的制备、计算公式等等，这些东东不算复杂，咱就直接切入正题，针对验证项目及测试操作而谈。
1、溶液配制（以下只写明需要配制哪些溶液，具体配制内容不细聊）
1.1流动相。
1.2空白溶液。
1.3专属性溶液：A标准溶液，2个已知杂质标准溶液，2个已知杂质加A样溶液各1份。（补充说明：空白溶液及A标准溶液在分析方法中是有的，后两个溶液若分析方法中未提及，则2个已知杂质标准溶液的浓度可自行确定，通常是按限度标准如0.2%来配制，也可以略高，方便能确切地看到杂质的保留时间即可，2个已知杂质加样溶液的浓度通常按含限度0.2%的杂质浓度制备）。此部分需要做降解试验，以确认降解杂质是否会对测试有干扰，由于降解试验太过复杂，在此不做描述。
1.4系统适应性溶液：制备分离度溶液、A标准溶液各1份。
1.5制备2个已知杂质检测限溶液1份。
1.6制备原料药A检测限溶液1份。
1.7制备2个已知杂质定量限溶液1份。
1.8制备原料药A定量限溶液1份。
1.9杂质线性溶液：2个已知杂质的LOQ，50%（这个浓度可自行根据需要选择），80%，100%，120%（也有做到150%或更高的，可自行根据需要选择，要求至少有5个点）各制备3份。
1.10原料药A线性溶液：主成分LOQ，50%（这个浓度可自行根据需要选择），80%，100%，120%（也有做到150%或更高的，可自行根据需要选择，要求至少有5个点）各制备3份。
1.11杂质回收率溶液： 2个已知杂质的LOQ，80%，100%，120%各制备3份。（注意准确度上限浓度不能超出线性范围的上限。）
1.12原料药A回收率溶液：主成分的LOQ，80%，100%，120%各制备3份。（注意准确度上限浓度不能超出线性范围的上限。）
1.13方法精密度溶液：准备6份样品加0.2%2个已知杂质的溶液。
1.14中间精密度溶液：另一检验人员在不同的天，准备6份与方法精密度同样批号的样品加0.2%杂质的溶液。
1.15耐用性溶液：耐用性的测试条件较多，有不同柱温、不同批号或不同厂家的柱子、不同流速、不同流动相比例、不同的流动相pH等，每次只改变一个条件。通常的变化范围流动相比例变化±5％、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、流速变化±20％。每一个条件需系统适应性溶液（分离度溶液和A标准溶液）1份，样品加0.2%2个已知杂质的耐用性测试溶液1份。
1.16 样品测试溶液。
2、实验测试操作过程
2.1 系统适应性：分离度溶液进1针，计算原料药A、2个已知杂质间的分离度；A标准溶液进6针，计算6针主峰面积的RSD、拖尾因子、理论板数等。
2.2 专属性：空白溶液，A标准溶液，单个杂质标准溶液，单个杂质加样溶液各1针，看主成分及杂质的保留时间，以及分离度是否符合要求。
2.3 杂质检测限：杂质检测限溶液3针，计算2个已知杂质峰的信噪比。
2.4 杂质定量限：杂质定量限溶液6针，计算2个已知杂质峰的信噪比以及峰面积的RSD。（注意定量限的精密度和回收率必须要做）
2.5 原料药A检测限：原料药A检测限溶液3针，计算2个已知杂质峰的信噪比。
2.6 原料药A定量限：原料药A定量限溶液6针，计算主成分峰的信噪比以及峰面积的RSD。（注意定量限的精密度和回收率必须要做）
2.7杂质线性范围：各线性溶液分别进1针，每个浓度平均结果进行线性回归，计算线性方程、相关系数、浓度范围。
2.8原料药A主成分线性范围：各线性溶液分别进1针，每个浓度平均结果进行线性回归，计算线性方程、相关系数、浓度范围。
2.9杂质回收率：各回收率溶液分别进1针，与理论结果比较，计算回收率。
2.10原料药A回收率：各回收率溶液分别进1针，与理论结果比较，计算回收率。
2.11方法精密度： 6份方法精密度溶液各进1针，计算6份测试的主成分峰面积RSD以及2个已知杂质含量RSD。
2.12中间精密度：另一检验人员在不同的天使用不同的仪器，在系统适应性符合要求后，6份中间精密度溶液各进1针，计算12份主成分峰面积RSD以及2个已知杂质含量RSD。
2.13耐用性：每一个不同条件下系统适应性符合要求后，耐用性测试溶液2针，与未改变条件时的杂质大小进行比较。
2.14 溶液稳定性：标准溶液与供试品溶液的稳定性都需要做，可根据测试序列运行的时间插入其中，每次1针，至少5次，计算不同时间主成分峰面积RSD以及2个已知杂质含量RSD或者比较杂质大小差异。

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symmacros

第1楼2018/10/13

应助达人

很详细的化学药品分析方法验证测试部分设计思路，学习了。

0

影子

第2楼2018/10/13

谢谢朱老师
symmacros(jimzhu) 发表:很详细的化学药品分析方法验证测试部分设计思路，学习了。

0

qianguiyun1

第3楼2018/10/14

应助达人

分析真全面

0

qianguiyun1

第4楼2018/10/14

应助达人

就没有国家标准参考吗？

0

影子

第5楼2018/10/14

大神，重点不在这里
做新药研发的，分析方法基本上完全得自已建
qianguiyun1(qianguiyun1) 发表:就没有国家标准参考吗？

0

沧海青城

第6楼2018/10/15

应助达人

非常专业啊

0

端木

第7楼2018/10/15

我是来拜读影子大神的作品的，比我们平常做的要细致好多

0

qianguiyun1

第8楼2018/10/15

应助达人

影子(hyheying) 发表: 大神，重点不在这里
做新药研发的，分析方法基本上完全得自已建
哦，研发得花很多精力

0

wangjunyu

第9楼2018/10/31

应助工程师

实验设计好就能少走很多弯路遇到问题也就有思路

0

JOE HUI

第10楼2018/11/07

应助达人

学习了影子大神的作品

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